葛根芩连配方颗粒标志性成分含量分析及指纹图谱研究.pdf

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1、第34卷分析化学FENXI~UAXUE研究简报第8期2006年8月ChineseJournaiofAnaiyticaiChemistryll09~lll2葛根茶连配方颗粒标志性成分含量分析及指纹图谱研究l＊ll222陈丽红王强刘济宁周嘉琳王永山徐以亮l2中国药科大学现代中药重点实验室中药分析教研室南京2l0038江阴天江药业有限公司江阴2l4434摘要采用反相高效液相色谱法-二极管阵列检测器以甲醇-水内含l%三乙胺l%乙酸用磷酸调p~至3为流动相对中药复方制剂葛根苹连配方颗粒中3种主要标志性成分的含量同时分析测定并采用相同的流动相对其指纹图谱进行研究实验结果显示3种主要标志

2、性成分葛根素黄苹昔和小渠碱在含量分析测定条件下各组分分离良好相关系数均为0.9999线性范围分别为0.042~l.050.l3~3.25和0.060~l.50-g加样回收率在95%~l06%之间在指纹图谱研究中以黄苹昔为参照物峰标定了32个共有峰分析的ll批葛根苹连配方颗粒与共有模式之间具有良好的相似性相似度均在0.9以上建立的含量测定及指纹图谱分析方法灵敏度高专属性强可用于葛根苹连配方颗粒的质量控制关键词反相高效液相色谱法二极管阵列检测器葛根苹连配方颗粒指纹图谱1引言葛根苹连汤原载于东汉张仲景伤寒论中是经典古方之一其处方为葛根半斤甘草二两炙黄苹三两黄连三两方中葛根为君药黄

3、苹黄连为臣药炙甘草为使药葛根黄苹和黄连中主要标l2志性成分分别为葛根素黄苹昔和小渠碱据报道葛根具有解热解痉作用黄连黄苹对伤寒杆菌痢疾杆菌金黄色葡萄球菌均有抑制作用黄连还有止泻镇痉作用为了保证葛根苹连配方颗粒质量有必要对以上3个标志性成分进行含量分析及指纹图谱研究目前葛根苹连制剂分析方法多采用3~5不同的流动相分别测定主要成分葛根素黄苹昔和小渠碱含量葛根苹连配方颗粒中3种主要标志性成分同时测定尚未见文献报道中药复方制剂成分复杂成分间相互干扰大且主要标志性成分类别不同葛根素为异黄酮C糖昔类黄苹昔为黄酮糖醛酸昔类小渠碱为原小渠碱类本实验采用高效液相色谱法同时测定葛根苹连配方颗粒中

4、主要标志性成分葛根素黄苹昔和小渠碱的含量并对其指纹图谱进行研究标定了32个共有峰分析方法省时简便为葛根苹连制剂的质量控制及进一步深入研究提供了方便2实验部分2.1仪器和试药ll00高效液相色谱仪包括Gl3l5B紫外-可见光二极管阵列检测器美国安捷伦公司Deita320-Sp~计METTLERTOLEDO葛根素黄苹昔和小渠碱对照品由中国药品生物制品检定所提供葛根苹连配方颗粒由江阴天江药业有限公司提供甲醇为色谱纯水为去离子水其余试剂均为分析纯2.2葛根茶连配方颗粒高效液相色谱条件色谱柱PhenomeneXLura反相Cl8色谱柱4.6mmX250mm5-mi.d.流动相A相为水

5、含l%三乙胺l%乙酸用磷酸调p~至3B相为甲醇流速l.0mL/min柱温30C进样量20-L2.3样品制备2.3.1混合对照品溶液的配制精确称取葛根素黄苹昔和小渠碱对照品适量用甲醇定容至l00mL得到含葛根素黄苹昔和小渠碱的混合对照品储备液冰箱中避光保存临用前用甲醇将混合对照品储备液逐级稀释得6个浓度水平的混合对照品工作溶液供作标准曲线2005-l2-l5收稿2006-02-22接受本文系国家863计划基金资助项目No.200lBA70lA4llll0分析化学第34卷2.3.2供试液制备精确称取0.24g葛根苹连配方颗粒:置于50mL量瓶中:加适量甲醇:超声提取30min共

6、2次:用甲醇定容至50mLO精密吸取2mL于l0mL量瓶中用水定容:样品溶液经0.45-m微孔滤膜过滤后待用O3结果与讨论3.1葛根茶连配方颗粒含量分析[6]3.1.1色谱条件忧化根据药典及葛根苹连配方颗粒全波长扫描图可知:葛根素黄苹昔最大吸收波长分别为250nm280nm;小渠碱的最大吸收波长265nm和346nmO实验发现小渠碱采用346nm时干扰较小:最终确定检测器波长为250nm280nm和346nmO实验时查阅参考文献[7:8]等考察了很多流动相:分离效果均不理想:最后采用甲醇-水(内含l%三乙胺l%乙酸:用磷酸调p~至3)为流动相:线性梯度洗脱时间程序甲

7、醇为27%~4l%时:葛根素黄苹昔和小渠碱3个主要标志性成分的分离度(R)分别为2.33.72.0:拖尾因子(T)分别为l.04l.09l.09:理论塔板数(N)5000以上:完全分离峰形较理想O图l为270nm波长下葛根素黄苹昔和小渠碱的对照品色谱图la和葛根苹连配方颗粒样品的色谱图lbO图l混合对照品(a)和葛根苹连配方颗粒样品(b)的色谱图Fig.lChromatogramsofmiXedstandardsoiution(a)andGegenOiniiandespensinggranuies(b