生物化学教学课件 实验七.docx

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1、实验七酮体的生成和利用一、目的和要求：了解酮体的生成部位及掌握测定酮体生成与利用的方法。二、实验原理：在肝脏线粒体中，脂肪酸经β-氧化生成的过量乙酰辅酶A缩合成酮体。酮体包括乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮三种化合物。肝脏不能利用酮体，只有在肝外组织，尤其是心脏和骨骼肌中，酮体可以转变为乙酰辅酶A而被氧化利用。本实验以丁酸为基质，与肝匀浆一起保温，然后测定肝匀浆液中酮体的生成量。另外，在肝脏和肌肉组织共存的情况下，再测定酮体的生成量。在这两种不同条件下，由酮体含量的差别我们可以理解以上的理论。本实验主要测定的是丙酮的含量。酮体测定的原理：在碱性溶液中碘可将丙酮氧

2、化成为碘仿。以硫代硫酸钠滴定剩余的碘，可以计算所消耗的碘，由此也就可以计算出酮体（以丙酮为代表）的含量。反应式如下：CH3COCH3十3I2十4NaOHCHI3十CH3COONa十3NaI十3H2OI2十2Na2S2O3Na2S4O6十2NaI三、实验准备：1.实验器材试管；移液管；锥形瓶；滴定管及架。2.实验试剂(1)0.1%淀粉液。(2)0.9%NaCl溶液。(3)15%三氯乙酸。(4)10％NaOH溶液。(5)10％HCl溶液。(6)0.5mol/L丁酸溶液：取5ml丁酸溶于100ml0.5mol/LNaOH中。(7)0.1mol/L碘液：I212.

3、5g和KI25g加水溶解，稀释至刻度1L，用0.1mol/LNa2S2O3标定。(1)0.02mol/LNa2S2O3:24.82gNa2S2O3·5H2O和400mg无水Na2CO3溶于1L刚煮沸的水中，配成0.1mol/L溶液，用0.1mol/LKIO3标定。临用时将标定Na2S2O3溶液稀释成0.02mol/L。四、实验内容及方法：1.标本的制备：将兔致死，取出肝脏，用0.9%NaCl洗去污血，放滤纸上，吸去表面的水分，称取肝组织5g置研钵中，加少许0.9%NaCl至总体积为10ml，制成肝组织匀浆。另外再取后腿肌肉5g，按上述方法和比例，制成肌组织

4、匀浆。2.保温和沉淀蛋白质：取试管3只，编号，按下表操作：管号试剂ABC肝组织匀浆—2.0ml2.0ml预先煮沸的肝组织匀浆2.0ml——pH7.6的磷酸盐缓冲液4.0ml4.0ml4.0ml正丁酸2.0ml2.0ml2.0ml43℃水浴保温60分钟肌组织匀浆—4.0ml—预先煮沸的肌组织匀浆4.0ml—4.0ml43℃水浴保温60分钟15%三氯醋酸3.0ml3.0ml3.0ml摇匀后，用滤纸过滤，将滤液分别收集在3支试管中,为无蛋白滤液。3.酮体的测定取锥形瓶3只，按下述编号顺序操作：编号123试剂无蛋白滤液5.0ml5.0ml5.0ml0.1mol/L

5、I2-KI3.0ml3.0ml3.0ml10%NaOH3.0ml3.0ml3.0ml摇匀，静置10分钟，向各管中加入10%HCl3ml,加1%淀粉液1滴呈兰色，分别用0.02mol/LNa2S2O3滴定至溶液呈亮绿色为止。五、实验作业：肝脏生成的酮体量（mmol/g）=(C－A)×Na2S2O3的摩尔数×1/6肌肉利用的酮体量（mmol/g）=(C－B)×Na2S2O3的摩尔数×1/6A:滴定样品1消耗的Na2S2O3ml数。B:滴定样品2消耗的Na2S2O3ml数。C:滴定样品3消耗的Na2S2O3ml数。思考题：为什么只有在肝外组织，酮体才可以被氧化利

6、用？