生物化学教学课件 实验四.docx

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1、实验四血糖的测定——葡萄糖氧化酶法一、目的和要求1.了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。2.掌握血糖测定的临床意义。二、实验原理葡萄糖氧化酶(GOD)能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶(POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在500nm波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下：三、实验准备试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计。试剂1.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0）　称取无水磷酸

2、氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于800ml蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠（或1mol/L盐酸）调节pH至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L。2.酶试剂　称取过氧化物酶1200U，葡萄糖氧化酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml中，用1mol/LNaOH调pH至7.0，加磷酸缓冲液至100ml。置冰箱保存，4℃可稳定3个月。3.酚溶液　称取重蒸馏酚100mg溶于100ml蒸馏水中（酚在空气中易氧化成红色，可先配成500g/L的溶液，贮存于棕色瓶中，用时稀释），用棕色瓶贮存。4.酶酚混合试剂　取

3、上述酶试剂与酚溶液等量混合，4℃可以存放一个月。5.12mmol/L苯甲酸溶液　溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水至1L。6．葡萄糖标准贮存液（100mmol/L）称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，并移入100ml容量瓶内，再以12mmol/L苯甲酸溶液加至100ml。7.葡萄糖标准应用液（5mmol/L）吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml于100ml容量瓶中，加12mmol/L苯甲酸溶液至刻度。四、实验内容及方法取3支试管,编号，按下表操作。表血糖测定操作步骤加入物(m

4、l)空白管标准管测定管血清－－0.2葡萄糖标准液－0.2－蒸馏水0.2－－酶酚混合液2.02.02.0混匀，置37℃水浴中保温15分钟，在波长505nm处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。　五、实验作业：计算：血清葡萄糖(mmol/L)=(测定管吸光度/标准管吸光度)×5.55正常参考范围：　3.9～6.1mmol/L临床意义：1.生理性高血糖可见于摄入高糖饮食或注射葡萄糖后，或精神紧张、交感神经兴奋，肾上腺分泌增加时。2.病理性高血糖　　⑴糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。　　⑵对抗胰岛素的激素分泌过多：如甲

5、状腺功能亢进、肾上腺皮质功能及髓质功能亢进、腺垂体功能亢进、胰岛α-细胞瘤等。　　⑶颅内压增高：颅内压增高（如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等）刺激血糖中枢，出现高血糖。　　⑷脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。3.生理性低血糖饥饿或剧烈运动、注射胰岛素或口服降血糖药过量。4.病理性低血糖　　⑴胰岛素分泌过多：由胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等引起。　　⑵对抗胰岛素的激素分泌不足：如腺垂体功能减退、肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退等。⑶严重肝病患者：肝贮存糖原及糖异生功能低下，不能有效调节血糖。