细胞培养的流程(精品).doc

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1、细胞培养的流程，从购买试剂、分装，到无菌操作、实验、观察的过程？对于新手来说，细胞培养真是太难了，很多的细节你不可能i下子就考虑到、预见到，因此请教细胞培养的高手就显得非常重要且可贵了。细胞培养包括仪器的清洗、消毒灭菌，试剂的购买、配制、分装，细胞的分离，无菌操作,培养细胞的观察，实验的设计，及结果的分析等等。但这每一个过程的含金量都很高，要求非常严格。如果你正在培养细胞，或曾经培养过细胞，你一定有很多的经验值得大家分享，你一定有你自己的一套培养细胞的流程，从哪开始到哪结束你也一定冇太多的想说。因此，你不妨说说你的细胞培养流程，以便我们广大的细胞培养新借以一鉴。于此，我先代表广大细

2、胞培养新手谢谢各位园丁里的奉献者！有空整理一下再写写。。呵呵谢了先版主建议不错，我刚开始养细胞时遇到的各种困难可以说是不计其数了，解决困难耗费了大量地时间，可惜呀！养细胞是一项即有难度又很讲究技术的过程，作起来不易，要真正详细的写出来示人更难!书上的规范和标准很多，但作起来每人都有自己的方法，适宜就好。我看还没有人跟帖，我就先说一点，从最初阶段开始：（自己的做法）（一）仪器的清洗总的分为两大类：可泡酸的和不可泡酸消毒的。酸指消毒的清洁液（由浓硫酸、重珞酸钾和蒸憎水配置的次强酸液）可泡酸的主要是玻璃仪器培养细胞的板了，离心管等槊料器川L。消毒过程：1‘1来水冲洗3・5遍_超声波清洗3

3、0,•…一烘干——激入清洁液过夜（不少于6h）——白来水冲洗彳5—20遍——蒸锢水洗3・5遍，烘干备用。不可泡酸的主要是胶塞和盖了，虑器等，先在清水小潼泡后冲洗烘干•…一2%NaOH泡过夜，自來水冲洗，5%HCI潼泡三ornin,流水冲洗…一蒸催水漂洗•…一烘干备用。消毒好的器具一定找个干净的柜了保存，使用前高压消毒灭菌，我科室主要使用铝制饭盒分装器具，挺方便的，用前高压。今天暂说一点，以后有机会再续，望给师弟妹们有所借鉴。斑竹不厚道，现在知道为什么没有别的战士跟贴了么？我怎么也耗了几十分钟打的字，你就这样打击别人的信心，还有可能往后面延续么！再说，经验何止这些这点……您的帖了我看

4、见了，您的抱怨我也接受！并且跟您补上一分！每个斑竹给分的标准有一定的差别，但是可以肯定的是：我们有白己的加分原则，人原则是不变的！比如：版内讨论得很多的东西，重复发帖一般不予以加分！您的这个帖子属于改范畴！感谢您对细胞版的支持！如果冇问题可以直接pm我们！再次感谢！再多说点啊！呵阿接着说呀，很好，很有帮助，我是新于，要多向你学习顶一下。我也说说我的一些体会吧。1X首先说清洗:对于玻璃器皿（如移液管、盖玻片之类）可先用酸液浸泡24h以上，再用清水浸泡24ho之示用清水将移液管冲洗10遍，除去残留酸液，再用双蒸水冲洗3・5遍，彻底洗净麻放入不锈钢筒屮，双层牛皮纸扎口,高压灭菌20min

5、,烘干待用。我们实验室的酸液一般是次强酸液（重锯酸钾120g浓硫酸200mL蒸懾水1000mL）配液时要小心烫伤。装培养基的瓶了则要在每次用完培养基以麻就要立即洗净，临用时再次用清水冲洗3・5遍，再用双熬水漂洗3次，洗净麻瓶口盖上锡箔纸，外包双层牛皮纸扎口后高压灭菌20min,与其配套的瓶盖则洗净示列行包好同时灭菌、烘干。培养基过滤器灭菌同瓶了，也要在用完示及时洗净、灭菌时保持密封。Tip头就容易了，插到盒子里，双层牛皮纸包好后直接高压灭菌就好了。2、再说说除菌:我说的除菌主要是指溶液的除菌。如PBS、HEPESZ类的一些缓冲剂和不含徜萄糖的盐溶液，可以配好以麻真接高压灭菌。而大部

6、分的溶液由于成分限制必须过滤除菌。我们实验室需要过滤除菌的溶液有：胶原酶、胰酶、各类血清、抗生索、G-418溶液、各类培养基、务类生长因了、丙酮酸钠、谷氨酰胺等.3、关于各类溶液的配制：我列出我们实验室常用试剂的配方吧：1XPBS：氯化钠8克、氯化钾0.2克、磷酸二氢钠行5克、磷酸氢二钾0.2克，加水至一升，调pH=7.4o这里我认为PBS的pH是最重要的一环，不可大意。HEPES溶液：8克氯化钠、0.3克氯化钾、0.135克磷酸氢二钠、1克葡萄糖、5克HEPES加水900ml,调pH=7.4抗生素：我们主要用青霉素和链霉素，一般丿U1XPBS稀释至1X105单位，・20度储存，用

7、时肓接加入培养基，工作浓度一般为1X102单位。G-41&1克包装的G-418瓶屮加入10mlHEPES溶液彻底溶解，过滤除菌麻分装于EP管,•20度保存。谷氨酰胺：L•谷氨酰胺29.2克,加HanksBBS1000ml溶解，配成200mmolZLi±滤除菌,4度保存，工作浓度1〜4mmol/L。加侑谷氨酰胺的培养液在4°C冰箱小储存2周以上时，应重新加入原来的谷氨酰胺。1XEDTA-K酶:0.25克胰酶加0.1克EDTA完全溶解于500ml1XPBS屮，过滤除菌麻分