DB34∕T 2410-2015 鸭坦布苏病毒抗体检测技术规程.pdf

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1、ICS11.220B41DB34安徽省地方标准DB34/T2410—2015鸭坦布苏病毒抗体检测技术规程TechnicalRegulationforDetectionofAntibodyagainstDuckTembusuVirus文稿版次选择2015-07-14发布2015-08-14实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T2410—2015前言本标准按GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省农业委员会提出。本标准起草单位：安徽农业大学动物科技学院、安徽省动物疫病预防与控制中心、宣城市动物疫病预防与控制中心。本标准主要起草人：王桂军、朱良强、耿照

2、玉、占松鹤、刘红梅、祁克宗、程帮照、刘雪兰、徐前明、王军、周迎春、张永宜。IDB34/T2410—2015鸭坦布苏病毒抗体检测技术规程1范围本标准规定了应用琼脂免疫扩散技术检测鸭坦布苏病毒抗体的方法。本标准适用于鸭坦布苏病毒的抗体检测，用于对该病的诊断、检疫和疫情监测。2检测材料2.1试验仪器——电子天平（0.001g）——微波炉——37℃恒温培养箱——琼脂凝胶梅花打孔器——移液器2.2TAE缓冲液（50×）：a)经基甲基氨基甲烷（Tris)242gb)冰乙酸57.1mLc)0.5mol/L乙二铵四乙酸二钠溶液（pH8.0)100mLd)灭菌双蒸水加至1000m

3、Le)用时用双蒸水稀释50倍，配制成1×TAE缓冲液。2.3标准抗原和阳性血清鸭坦布苏病毒琼脂扩散抗原由坦布苏病毒病毒安徽分离株AH-F10株（CCTCCV201213）经甲醛灭活制备而成。阳性血清由坦布苏病毒病毒安徽分离株AH-F10株（CCTCCV201213）制备油佐剂灭活制剂免疫健康鸭，分离血清制备而成。3检测3.1采血用一次性注射器从待检鸭翅静脉无菌采血2ml。3.2分离血清静止血样，待血液凝固后，离心，分离上层血清待检。3.3琼脂糖凝胶板的制备1DB34/T2410—2015用1×TAE缓冲液配置1％琼脂糖，微波炉中煮沸溶解，冷却至60℃左右，倒入平

4、皿（直径9cm）中制作琼脂糖凝胶板，琼脂糖凝胶厚度约4mm，完全凝固后备用。3.4打孔用梅花打孔器在上述琼脂糖凝固板上打孔，孔径5mm、孔距3mm。打孔结束后，取适量1％琼脂糖封底，以避免血样渗漏。3.5加样用移液器在中间孔加入DTMUV标准抗原，1号、4号孔加入阳性血清，2、3、5、6号孔加入待测血清。每孔血清加满，不可溢出。如图1所示：1阳性血清26标准抗原35待测血清4图1完成加样后，将琼脂板倒置放入湿盒内，置于37℃培养箱中24～48h。4结果判定在标准抗原孔与阳性血清孔中间形成一条清晰的沉淀带时，才能进行结果判定。观察时，可在黑色背景衬托下进行判定。4

5、.1阳性结果被检血清孔与标准抗原孔之间形成一条致密沉淀带，并与阳性对照沉淀带平滑相连，即可判断为阳性。4.2阴性结果被检血清孔与标准抗原孔之间无沉淀带出现；出现的沉淀带与阳性对照交叉或者不相连，为非特异性反应，也判定为阴性。4.3可疑被检血清孔与标准抗原孔之间沉淀带不清晰，应予以重测，重测结果相同，即判为阳性。重测结果无沉淀带判为阴性。_________________________________2