鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒二重RT-PCR检测方法的建立.pdf

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1、南方农业学报JOURNAL0FSOUTHERNAGRICuIJTURE2014，45(2)：314—317ISSN2095一l19l：CODENNNXAABhttp：，，www．州[nyxb．cnDOI：10．3969／j：issn．2095—1191．2014．2．314鸭坦布苏病毒与鸭瘟病毒二重RT—PCR检测方法的建立张艳芳，谢芝勋+，谢丽基，刘加波，庞耀珊，邓显文，谢志勤，范晴，罗思思(广西兽医研究所／广西畜禽疫苗新技术重点实验室，南宁530001)摘要：【目的】建立可同时检测鸭坦布苏病毒(Ducktembusuvims，DTMIⅣ)与鸭瘟病毒(Duc

2、kplaguevims，DPV)的二重RT—PcR，为有效防控DTMuv与DPv提供技术支撑。【方法】根据GellBaIll(中DTMIⅣE基因和DPv【JI德因的保守序列，设计合成两对引物，优化反应体系条件，并通过特异性、敏感性试验评价建立的二重RT-PcR。【结果l优化后的二重RT．PcR反应体系为：2×PcRMix12．5仙L，其中DTM【Jv上、下引物各o．5斗L，DPV上、下引物各O．5肛L，混合模板2．0斗L，d担20补足至25．0斗L；最佳反应程序：95。C预变性5mill；95℃1min，54．4℃lmin，72℃1min，进行35个循环；72

3、℃延伸10min。该方法对DTMIⅣ与DPV的检测敏感性分别达500和600fg，但对鸭源新城疫病毒、鸭肝炎病毒、番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、H9亚型禽流感病毒和减蛋综合症病毒等病原体不敏感。【结论】建立的二重RT．PCR可用于DTMuV与DPV感染的快速鉴别诊断。关键词：鸭坦布苏病毒；鸭瘟病毒；二重RT-PcR；特异性；敏感性中图分类号：s858．32文献标志码：A文章编号：2095—1191(2014)02—0314—04DeVelopmentofaduplexRT—PCRassayfordetectionofducktemDUSUVlrUSanndUCKp

4、lagUeVlrUS●1●ZHANGYan—fang，XIEZhi—xun+，XIELi-ji，UUJia—bo，PANGYao—shan，DENGXian—wen，XIEZhi—qin，FANQing，LU0Si—si(Guan鲥VeterinaryResearchInstitute，Guan鲥KeyLabomtoryofAnimalVaccinesandDiagIlostics，Nanning530001，China)Abstract：【0bjective】AduplexRT-PcRassayfordetectingbothducktembusuvirus

5、(DTMuV)andduckplaguevimswasdevelopedtopmvidetechnicalsupPonfbre珏ectivecontmlofDTMUVandDPV．【Method】AccordingtothegenesequencesofducktembusuvirusEgeneandduckplaguevilllsUL6geneinGenBank，twosetsofspecificprimersweredesigned．ThedupkxPCRassaywasdevelopedthIDughoptimizationofreaetioncondi

6、tionsandvalida“onofspecifieity，sensitivityandrepetitivenessofthemethod．【Result】TheoptimizedRT—PCRreactionsystemwas2×PCRMix12．5斗L，ofwhichtupstI．eamanddownstIeampdmerofDTMUVandDPVwas0．5斗Leach．Themixedtemplatewas2．0斗Landaddedto25．0斗LwithddH20．Theoptimalreactionpmcedurewas95℃initialdena

7、tumtionfor5min，95℃for1min，54．4ccfor1min，72℃for1minwith35cyclesand72℃extensionfor10min．7Ihesensitivityoftheassaywas600fgforducktembusuvimsand500fgforduckplaguevims，butitwasnotsensitivetootherduckpathogens，suchasducknewcastlediseasevims，duckhepatitisvirus，Muscovyduckparvovims，duckcirc

8、ovims，H9subtypeavia