猪圆环病毒2型体外诱导RAW264.7细胞氧化应激模型的建立.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthernAgrieuhure2017，48(1)：151—157ISSN2095—1191；CODENNNXAABhttp：／／www．nfnyxb．comDOI：10．3969／j：issn。2095-1191。2017．叭．151猪圆环病毒2型体外诱导RAW264，．7细胞氧化应激模型的建立杨剑，尹丹，郝祝兵，谭红连，韦英益，曾芸，胡庭俊+(广西大学动物科学技术学院，南宁530004)摘要：【目的】探讨猪圆环病毒2型(PCV2)感染量、感染时间与被感染RAW264．7细胞活性氧水平动态变化的相

2、关性，为建立RAW264．7细胞氧化胁迫体外模型提供参考依据。【方法】PCV2原液调至5x106／mL，经10、10：、103和104f立稀释(10～、lO～、10。和104稀释度)后，感染作用RAW264．7细胞2h，弃病毒液，加入含5％FBS的DMEM培养液继续培养，分别于第4、8、12、24和48h收集细胞上清液或细胞，测定一氧化氮(NO)、活性氧自由基(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、黄嘌呤氧化酶(xoD)、髓过氧化物酶(MPO)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)等指标。【结果】10。PCV2感染

3、RAW264．7细胞后能有效升高细胞NO、ROS水平，降低细胞GSH水平和GSH／GSSG，升高细胞XOD、MPO和iNOS活性，表明以10。1PCV2感染RAW264，7细胞一定程度上能改变细胞氧化还原状态，诱导细胞产生氧化应激。【结论】PCV2感染能诱导RAW264．7细胞发生氧化应激，并确立10。PCV2(5x10S／mL)体外感染RAW264．7细胞4~24h是建立RAW264．7细胞氧化胁迫模型的最佳条件。关键词：猪圆环病毒2型(PCV2)；RAW264．7细胞；氧化应激；模型中图分类号：$858．28文献标志码：A文章编号

4、：2095—1191(2017)01—0151—07EstablishingoxidativestressmodelofRAW264．7cellsinducedbypt3"circovirustype2’vitroDyorclneClrcoVlrustye2InviYANGJian，YINDan，HAOZhu-bing，TANHong-lian，WEIYing-yi，ZENGYun，HUTing-jun+(CollegeofAnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning5300

5、04，China)Abstract：【Objective】Thepresentstudyinvestigatedtherelationshipbetweeninfectiondose，infectiontimeofporcinecircovirustype2(PCV2)anddynamicchangesofreactiveoxygenspecies(ROS)levelsinPCV2infeetedRAW264．7cells．SOastoprovidearefereneefortheestablishmentofinvitrooxida

6、tivestressmodelofRAW264．7cell．【Method】PCV2virusliq．uidof5×106]mLwasprepared，andwas10，102，103and104timesdiluted(10～，10‘’，10。，104dilutions)beforeuse．RAW264．7cellswereinfectedwithfivedifierentconcentrationsofPCV2for2hours．andthenvirusliquidswerediscard—ed．Theceilswerecultu

7、redinDMEMafteradding5％FBSfor4，8，12．24and48h．Cellsupernatantorcellswerecollectedandlevelsofnitricoxide(NO)，reactiveoxidespecies(ROS)，reducedglutathione(GSH)，oxidizedglu—tathione(GSSG)，xanthineoxidase(XOD)，myeloperoxidase(MPO)andinduciblenitricoxidesynthase(iNOS)werede—te

8、rmined．【Result】After10。PCV2infectedRAW264．7cells，levelsofNOandROSincreasedwhileGSHlevelsandGSH／GSSGratiodecrea