PCR测定临床应用及结果临床意义.doc

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1、北京大学人民PCR测定临床应用及结果临床意义测定临床应用及结果临床意义医院张正100044概述临床PCR检测三条件检测三条件临床？SDA批准使用的试剂盒批准使用的试剂盒？国家批准符合要求的实验室？经行政部门同意并培训后持证上岗关于结核杆菌等5项检测的关于结核杆菌等项检测的具体应用?结核分枝杆菌结核分枝杆菌(TB)实验设计特点靶序列来源：靶序列来源a.单抗检出的抗原旦白编码基因单抗检出的TB抗原旦白编码基因b.TB特异性核酸片段克隆特异性核酸片段克隆c.插入序列举例65KD,165bp;MPB64,240BP;IS6110,123bp;IS986,245bp;16sDNA,584bp.注意事

2、项？标本处理:痰液化，抑制物去除痰液化,?试剂质控及灵墩度临床评价？结核的结核的PCR临床主要丿应用临床主要应用a.结核与其他分枝杆菌区分结核与其他分枝杆菌区分b.结核耐药基因结核耐药基因c.对伤菌量低的标木的分离对含菌量低的标本的分离d.为临床可疑者捕捉信息为临床可疑者捕捉信息临床评价？PCR方法与痰涂片及培养的比较方法与痰涂片及TB培养的比较方法与痰涂片及应做比对研究?沙眼衣原体沙眼衣原体(Ct)实验设计特点靶及引物选择？外膜蛋门基因？外膜蛋白基因(MOMP-OMPI)外膜蛋白基因(MOMP-OMPI)?7.5kb质粒隐蔽性基因质粒拷贝质粒？16s「RNA基因注意事项标本取材是关键临床

3、评价？细胞培养McCoy.Hela-229金标准细胞培养金标准？ELA法法？PCR法•专家希望此法为新金标专家希望此法为新金标法专家M??HBV-DNA实验设计特点?$及（2混合引物及混合引物？定量用治疗监测104,106临床评价一般临床靠免疫标志但无法明确时可测拉米咲定及干扰素治疗监测新问题研究?HCV-RNA实验室设计特点？需扩增二次？低温启动低温启动UDG系统系统-RNA不稳定性系统不稳定性注意事项防止RNase污染污染防止杜绝溶血临床评估？定性用于诊断（只有抗HCV无法决定病毒存在状况）？定量用丁治疗监测?HLA分子生物学:PCRSSCPRFLP基因芯片I类(A,B,C)与疾病发生

4、频率有关II类(DR,DQ,DP)等移植配型方法：方法免疫学DR为例为例设计10条特异性引物设计条特异性引物:DR1-DR10条特异性引物设计2条组特异性引物设计条组特异性引物:3568,DRB1条组特异性引物选择具中某些组合成上，下游引物选择其中某些组合成上下游引物据bp数推算等位基因数推算等位基因局限性：局限性DR6用排它法用排它法有6种表型种表型（DR3/DR3,种表型DR8/DR6等）不能区分等不能区分临床评价中共同问题假阳性与假阴性？假阳残余模板的污染其它假阳:残余模板的污染假阳？假阴标本处理不当其它假阴:标本处理不当假阴阳性率与“金标准”阳性率与“金标准不能单向强调PCR的优势

5、和检出率应的优势和检出率应不能单向强调与传统方法比对，合理判断与传统方法比对合理判断临床实践是判断PCR结果最重要的依据结果最重要的依据临床实践是判断临床实践是检验实验室工作的标准重视从临床实践找出问题和评价