PCR测定临床应用及结果临床意义.ppt

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1、PCR测定临床应用及结果临床意义北京大学人民医院张正100044概述临床PCR检测三条件•SDA批准使用的试剂盒•国家批准符合要求的实验室•经行政部门同意并培训后持证上岗关于结核杆菌等5项检测的具体应用•结核分枝杆菌(TB)靶序列来源:a.单抗检出的TB抗原旦白编码基因b.TB特异性核酸片段克隆c.插入序列实验设计特点举例65KD,165bp;MPB64,240BP;IS6110,123bp;IS986,245bp;16sDNA,584bp.注意事项•标本处理：痰液化，抑制物去除•试剂质控及灵敏

2、度临床评价•结核的PCR临床主要应用a.结核与其他分枝杆菌区分b.结核耐药基因c.对含菌量低的标本的分离d.为临床可疑者捕捉信息•PCR方法与痰涂片及TB培养的比较应做比对研究临床评价沙眼衣原体(Ct)实验设计特点靶及引物选择•外膜蛋白基因(MOMP-OMPI)•7.5kb质粒隐蔽性基因质粒拷贝•16srRNA基因注意事项标本取材是关键临床评价•细胞培养McCoy.Hela-229金标准•ELA法•PCR法.专家希望此法为新金标HBV-DNA.实验设计特点•S及C混合引物•定量用治疗监测104,

3、106临床评价一般临床靠免疫标志但无法明确时可测拉米呋定及干扰素治疗监测新问题研究HCV-RNA实验室设计特点•需扩增二次•低温启动UDG系统--RNA不稳定性注意事项防止RNase污染杜绝溶血临床评估•定性用于诊断(只有抗HCV无法决定病毒存在状况）•定量用于治疗监测HLA方法:免疫学分子生物学：PCRSSCPRFLP基因芯片I类(A,B,C)与疾病发生频率有关II类(DR,DQ,DP)等移植配型DR为例设计10条特异性引物:DR1-DR10设计2条组特异性引物:3568,DRB1选择其中某些

4、组合成上,下游引物据bp数推算等位基因局限性:DR6用排它法有6种表型(DR3/DR3,DR8/DR6等)不能区分临床评价中共同问题假阳:残余模板的污染其它假阴:标本处理不当其它假阳性与假阴性不能单向强调PCR的优势和检出率应与传统方法比对,合理判断阳性率与“金标准”临床实践是检验实验室工作的标准重视从临床实践找出问题和评价临床实践是判断PCR结果最重要的依据Theend