间充质干细胞培养大全.doc

《间充质干细胞培养大全.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、间充质干细胞培养大全1•间充质干细胞MSC基本形态体外培养细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支持物上生长特征,可分为贴附型生长细胞，常表现为成纤维型细胞和上皮细胞。悬浮型细胞在培养中悬浮生长。间充质干细胞MSC基木形态：形态与成纤维细胞类似，细胞在支持物表面呈梭形或不规则三角形生长，细胞中央有卵圆形核，胞质向外伸出2-3厘米个长短不同的突起。可看到细胞成螺旋状生长。2.干细胞应用与干细胞调控干细胞的调控是指给出适当的因子条件，对干细胞的增殖和分化进行调控，使之向指定的方向发展。2.1内源性调控干细胞自身冇许多调控因子可对外界信号起反应从而调节其增殖和分化，包括调节细胞不对称分裂的蛋白，

2、控制基因表达的核因子等。另外，干细胞在终末分化之前所进行的分裂次数也受到细胞内调控因子的制约。（1）胞内蛋白对干细胞分裂的调控干细胞分裂可能产生新的干细胞或分化的功能细胞。这种分化的不对称是由于细胞本身成分的不均等分配和周围环境的作用造成的。细胞的结构蛋白，特别是细胞骨架成分对细胞的发育非常重耍。如在果蝇卵巢屮,调控干细胞不对称分裂的是一种称为收缩体的细胞器，包含冇许多调节蛋白，如膜收缩蛋白和细胞周期素A。收缩体与纺锤体的结合决定了干细胞分裂的部位，从而把维持干细胞性状所必需的成分保留在子代干细胞中。（2）转录因子的调控在脊椎动物中，转录因子对干细胞分化的调节非常重要。比如在胚胎干细胞

3、的发生中，转录因子Oct4是必需的。Oct4是一种哺乳动物早期胚胎细胞表达的转录因子，它诱导表达的靶基因产物是FGF-4等生长因子,能够通过生长因子的旁分泌作用调节干细胞以及周围滋养层的进一步分化。Oct4缺失突变的胚胎只能发育到囊胚期，其内部细胞不能发育成内层细胞团。另外白血病抑制因子（LIF）对培养的小鼠ES细胞的自我更新有促进作用，而对人的成体干细胞无作用，说明不同种属间的转录调控是不完全一致的。又如Tcf/Lef转录因子家族对上皮干细胞的分化非常重耍。Tcf/Lef是Wnt信号通路的中间介质，当与P-Catenin形成转录复合物后,促使角质细胞转化为多能状态并分化为毛囊。2.2

4、外源性调控除内源性调控外，干细胞的分化还可受到其周围组织及细胞外基质等外源性因素的影响。（1）分泌因子间质细胞能够分泌许多因子，维持干细胞的增殖，分化和存活。有两类因子在不同组织甚至不同种属中都发挥重要作用，它们是TGFB家族和Wnt信号通路。比如TGF家族中至少有两个成员能够调节神经悄干细胞的分化。最近研究发现，胶质细胞衍生的神经营养因子（GDNF）不仅能够促进多种神经元的存活和分化，还对精原细胞的再生和分化冇决定作用。GDNF缺失的小鼠表现为T细胞数量的减少，而GDNF的过度表达导致未分化的精原细胞的累积。Wnts的作用机制是通过阻止0-Catenin分解从而激活Tcf/Lef介导

5、的转录，促进干细胞的分化。比如在线虫卵裂球的分裂中，邻近细胞诱导的Wnt信号通路能够控制纺锤体的起始点和内胚层的分化。(2)膜蛋白介导的细胞间的相互作用冇些信号是通过细胞■细胞的直接接触起作用的。0-Catenin就是一种介导细胞粘附连接的结构成分。除此之外，穿膜蛋白Notch及其配体Delta或Jagged也对干细胞分化有重要影响。在果蝇的感觉器官前体细胞，脊椎动物的胚胎及成年组织包括视网膜神经上皮、骨骼肌和血液系统中，Notch信号都起着非常重耍的作用。当Notch与其配体结合吋，干细胞进行非分化性增殖；当Notch活性被抑制时，干细胞进入分化程序，发育为功能细胞。(3)整合素(I

6、ntegrin)与细胞外基质整合素家族是介导干细胞与细胞外基质粘附的最主要的分子。整合素与其配体的相互作用为干细胞的非分化增殖提供了适当的微环境。比如当整合素丧失功能时，上皮干细胞逃脱了微环境的制约，分化成角质细胞。此外细胞外基质通过调节整合素的表达和激活，从而影响干细胞的分布和分化方向。2.3T细胞的可塑性越来越多的证据表明，当成体干细胞被移植入受体屮，它们表现出很强的可塑性。通常情况下，供体的干细胞在受体中分化为与其组织來源一致的细胞。而在某些情况下干细胞的分化并不遵循这种规律。：L999年Goodell等人分离出小鼠的肌肉干细胞，体外培养5天后，与少量的骨髓间质细胞一起移植入接受

7、致死量辐射的小鼠屮，结果发现肌肉干细胞会分化为各种血细胞系。这种现象被称为干细胞的横向分化(trans-differentiation)。关于横向分化的调控机制目前还不清楚。大多数观点认为干细胞的分化与微环境密切相关。可能的机制是，干细胞进入新的微环境后，对分化信号的反应受到周围正在进行分化的细胞的影响，从而对新的微环境中的调节信号做出反应。2.间充质干细胞MSC生长过程潜伏期一指数增生期一停滞期(1)潜伏期(latentphase)细胞接种后