探讨慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子的表达变化及临床意义.doc

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1、探讨慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子的表达变化及临床意义摘要：目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子的表达变化及临床意义。方法选取南昌大学第一附属医院收治的慢性乙型肝炎患者40例作为观察组，所有患者均予以外周血T淋巴细胞表面CD4*、CD8*、CD4*/CD8*比值、CTLA-4等共刺激分子的表达变化测定，同时选取健康患者39例作为对照组，统计两组患者的测定结果。结果观察组中治疗组、治疗无效组、治疗有效组CD4*、CD8*T淋巴细胞亚群绝对表达量均明显下降，低于对照组（P关键词：

2、慢性乙型肝炎；外周血；T淋巴细胞；共刺激分子；表达变化慢性乙型肝炎源于机体细胞免疫功能紊乱，不能有效清除体内病毒，其中T淋巴细胞在主导机体免疫功能方面发挥着重要的作用［1］。笔者主要探讨慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞表面共刺激分子的表达变化及临床意义，将结果报告如下：1资料与方法1.1一般资料本次选取的40例研究对象均为南昌大学第一附属医院于2013年4月〜2015年1月收治的慢性乙型肝炎患者作为观察组，所有患者均知情同意，其中男29例，女11例，年龄37〜68岁，平均年龄（45.3+5.6）岁；职业：教师

3、16例、农民工4例、企业高管8例、退休在家12例。所有患者经检查,均符合慢性乙型肝炎的诊断标准,排除神经系统障碍、严重心脑血管疾病、全身免疫系统疾病、凝血及造血功能障碍、甲型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎等患者。同时选取健康患者39例作为对照组，其中男30例，女9例，年龄36〜69岁，平均年龄（45.8±5.7）岁；职业：教师15例、农民工5例、企业高管9例、退休在家11例。两组患者在性别、年龄等资料方面无显著差异（P>0.05）,具有可比性。1.2方法121试剂在测定过程中，需要用到的试剂：鼠抗人CD3-APC、

4、CD8-FIT、CTLA-4-PE、PD-1-PE荧光素标记单克隆抗体，LgG-FITC>IgG-PE.IgG-APC同型对照融血剂，由美国BD公司提供；另外需要乙型肝炎病毒及耐药突变检测试剂盒、HBV标志物检测试剂盒、ALT检测试剂盒。1.2.2仪器流式细胞仪、扩增仪、高速冷冻离心机、全自动生化分析仪、全自动酶免分析仪、低温冰箱。1.2.3测定外周血T淋巴细胞表面共刺激分子检测具体方法：患者晨起空腹抽取外周静脉血3ml,抗凝混匀后分别置于5支不同的测定管中：其中第一管加入CD3、CD8、CD28,第二管中加

5、入单抗CD3、CD8、CTLA-4,第三管中加入CD3、CD8、PD-1,第四管中加入单抗CD3、CD8、Tim-3,第五管中加入IgG-FTTCIgG-PEIgG-APC作为同型对照管，所有试管中均加入单抗20U1,摇匀后在常温下状态下放置30min,然后加入新鲜配置的溶血剂摇匀，在光线暗处放置15min并离心5min,使用磷酸盐缓冲液进行3次洗涤，并且每管中加入0.3mlPBS,在4。C中放置后在Id内检测。为了使结果更加精准，辅助测定方法：并采用定时荧光定量PCR检测技术测定血清中HBV（乙型肝炎病毒）

6、、DNA（脱氧核糖核酸）含量;采用双抗体夹心时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎病毒；采用全自动生化分析仪监测丙氨酸转氨酶含量。1.3观察指标将观察组分为为治疗组、治疗无效组、治疗有效组，与对照组作比较。分析两组患者外周血T淋巴细胞亚群相对表达量［2］。分析两组患者外周血T淋巴细胞亚群绝对表达量［3］。1.4统计学方法采用SSPS20.0软件进行数据的处理与分析，表示计量数据资料，采用t检验，(%)表示计数资料，并进行％2检验，P