DB22∕T 3035-2019 普通级实验用猫杯状病毒抗体检测 ELISA法.pdf

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1、ICS11.220B41DB22吉林省地方标准本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T3035—2019普通级实验用猫杯状病毒抗体检测ELISA法本标准仅供内部使用不得翻印DetectionofconventionalexperimentalcatfelinecalicivirusELISAmethod2019-05-27发布2019-06-17实施吉林省市场监督管理厅发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T3035—2019本标准仅供内部使用不得翻印前言本标准按GB/T1.1-2009和GB/

2、T20001.4-2015给出的规则起草。本标准由吉林省科学技术厅提出并归口。本标准起草单位：吉林大学。本标准主要起草人：袁宝、刘明慧、任文陟、胡进平、陈健、高巍、刘殿峰、张嘉保、权福实、张金玉。本标准仅供内部使用不得翻印I本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T3035—2019本标准仅供内部使用不得翻印普通级实验用猫杯状病毒抗体检测ELISA法1范围本标准规定了普通级实验用猫杯状病毒抗体ELISA检测方法的原理、材料、检测和结果判定。本标准适用于普通级实验用猫杯状病毒检测。2规范性引用文件下列

3、文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T14926.50实验动物酶联免疫吸附试验NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范3原理包被于固相载体表面的已知抗原与待检血清中的特异性抗体结合形成免疫复合物，本标准仅供内部使用不得翻印此抗原抗体复合物可与相应的第二抗体酶结合物结合。在酶的催化作用下底物发生反应，产生有色物质。颜色反应的深浅与待检血清中所含有的特异性抗体的量成正比。4材料4.1器材4.1

4、.1酶标仪，波长405nm〜630nm。4.1.2恒温培养箱，室温〜50℃。4.1.3离心机，1000r/min〜4000r/min和30000r/min〜80000r/min。4.1.4微量加样器，5µL〜50µL和50µL〜200µL。4.1.5聚苯乙烯板，96孔，无菌。4.2试剂4.2.1抗原4.2.1.1标准阳性抗原用FCV标准毒株感染F81细胞，接种3天〜5天，细胞融合80%以上时收获培养液。冻融3次后，2000r/min离心（4.1.3）去除细胞碎片，上清液再经40000r/min离心（4.1.3）浓缩后制成

5、标准阳性抗原。4.2.1.2标准阴性抗原F81细胞冻融破碎后，经2000r/min离心（4.1.3）去除细胞碎片获得的上清液制成标准阴性抗原。1DB22/T3035—20194.2.2血清4.2.2.1阳性血清本标准仅供内部使用不得翻印FCV抗原免疫的普通级实验用猫血清。4.2.2.2阴性血清无FCV感染的普通级实验用猫血清。4.2.3酶结合物辣根过氧化物酶标记羊或兔抗猫IgG抗体。4.2.4包被液、洗涤液、稀释液、底物溶液和终止液符合GB/T14926.50要求。5检测5.1血清采集及处理按照NY/T541规定执行。5

6、.2抗原包被本标准仅供内部使用不得翻印将标准阳性抗原和标准阴性抗原分别用包被液（4.2.4）稀释。每孔100µL，置培养箱（4.1.2）37℃孵育2h，4℃过夜。5.3洗涤用洗涤液（4.2.4）洗涤5次，每次3min，拍干。5.4加样待检血清用稀释液（4.2.4）按1：20稀释，分别加入标准阳性抗原孔和标准阴性抗原孔，每孔100µL，同时设阴性、阳性和空白对照，置培养箱（4.1.2）37℃孵育1h～1.5h，按5.3洗涤。5.5加酶结合物用稀释液（4.2.4）将酶结合物按1:1000稀释，每孔加入100µL，置培养箱（4

7、.1.2）37℃孵育1h～1.5h，按5.3洗涤。5.6加底物溶液每孔加入新配制的底物溶液（4.2.4）100µL，置室温，避光显色5min～10min。5.7终止反应每孔加入终止液（4.2.4）50µL。5.8测A值用酶标仪（4.1.1）490nm波长测定各孔A值。2DB22/T3035—20196结果判定6.1在标准阳性血清A值≥0.2且标准阳性血清A值/标准阴性血清A值≥2.1时进行结果本标准仅供内部使用不得翻印判定。6.2待检血清A值/阴性血清A值≥2.1，判为抗体阳性，反之，判为抗体阴性。___________

8、______________________本标准仅供内部使用不得翻印3