贴壁细胞的培养.doc

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1、实验报告三（2015.5.17）贴壁细胞培养姓名：王亚斌班级：生物技术12（1）班学号：2012332860026成绩优秀良好中等及格不及格一、实验目的初步掌握贴壁细胞培养的基木操作过程，为生物技术在医学上的应川打下基础。二、实验器材倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精灯等三、方法步骤、观察内容1.用倒置显微镜观察细胞，评估细胞（喉癌）生长状态以及确认无细菌和真菌污染。弃I口培养液：吸除或倒掉培养1111屮的I口培养基。2.漂洗：每个培养1111加ImLPBS清洗单层细胞，漂洗贴壁细胞一次后倒掉。3

2、.消化：每个dish加入ImL消化液（0.25%胰蛋白酶或0.025EDTA混合液1:1）,轻轻摇动培养川L,经消化液铺满所有细胞表面，在倒置显微镜下待1/2细胞变圆示加适量完全培养液终止。4.离心：1000「pm、5分钟离心沉淀细胞，去除培养基（含胰酶及EDTA）。5.计数：离心前先滴好计数板待计数，计算细胞的浓度（个/別）。取对数生长期于10cmdish的肿瘤细胞按上述操作消化计数示以2.5X105/孔（5X105/孔）密度铺于6孔板，再用完全培养液补至2ml/孔。四、观察结果试验中所添加的防己诺林碱浓度分别为Oum/ml

3、2um/ml4um/ml6um/ml8um/ml1Oum/ml,下图是各个梯度细胞存亡情况:由上图可以看岀，随着防己诺林碱浓度的升高，细胞数口衣逐渐地减少，当防己诺林碱浓度在Sum/ml的时候细胞形态发生明显变化，从闘球形变为梭形，而且数量有明显的减少，nJ'以看出在这个浓度下细胞开始发生凋亡。五、分析讨论木次试验在在不同浓度防己诺林碱作用相同时间下，细胞数目和形态有明显不同。防己诺林碱浓度越高，细胞数H越少，形态也发生变化。说明…定浓度的防己诺林碱可以起到抑制细胞的繁殖和数忖的增长，而达到8um/ml及更高时，细胞开始发生凋

4、亡，lOirni/ml浓度时，细胞的增殖受到了明显的抑制。由此推测防己诺林碱可抑制喉癌细胞增值作川，且浓度越高抑制作用越强。高浓度的防己诺林碱萇至可使细胞发生凋亡。以上结果表明防己诺林碱有可能成为喉癌治疗的一种潜在药物。