高效液相色谱法同时测定食品中6种对羟基苯甲酸酯.pdf

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1、第40卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第4期2012年4月ChineseJournalofAnalyticalChemis~Iry529～533DoI：10．3724／SP．J．1096．2012．10911高效液相色谱法同时测定食品中6种对羟基苯甲酸酯曹淑瑞1,2刘治勇张雷李贤良王国民唐柏彬袁若屹(重庆出人境检验检疫局，重庆400020)(西南大学化学化工学院，重庆400715)(重庆医科大学药学院，重庆400016)摘要建立了同时检测食品中6种对羟基苯甲酸酯的高效液相色谱一二极管阵列检测器(HPLC—DAD)定量分析方法。样品用乙腈提取，经LC—c。s固相萃取柱净化，采用

2、AgilentC色谱柱分离，甲醇／水溶液梯度洗脱，二极管阵列检测器检测，外标法定量。结果表明：6种对羟基苯甲酸酯在1．O～500．0mgm范围内线性关系良好(r≥O．9997)；检出限为0．0016~一0．0081mg／L(S／N=3)；6种对羟基苯甲酸酯各添加水平在经表面处理的新鲜蔬菜、水果、醋、碳酸饮料及牛奶，食品馅料中的回收率为85．1％～95．4％；相对标准偏差为3．6％～10．9％。关键词高效液相色谱法；对羟基苯甲酸酯；固相萃取；食品1引言对羟基苯甲酸酯为常用防腐剂之一，其抑菌范围广、作用强、用量少、毒性：低、易配伍且防腐效果不易随pH值的变化而变化，在碱性环境下尚有效[1’2

3、】，对食品起到保鲜与防腐作用。近年来，对羟基苯甲酸酯类防腐剂被广泛应用于各种食品中，但是大量或不当使用防腐剂会对人体造成一定损害，如有雌激素样作用，影响人的内分泌功能等I4】。因此，中国、加拿大、日本和欧盟等许多国家和国际组织对食品中对羟基苯甲酸酯类防腐剂的使用制定了添加限量]。目前，对羟基苯甲酸酯的测定方法主要有高效液相色谱法】、薄层色谱法”、气相色谱法、气相色谱一质谱法[t4,15和毛细管电泳法等。王萍亚等川用高效液相色谱法测定腌菜中6种对羟基苯甲酸酯；迪丽努尔·马力克等用气相色谱法测定液状食品中4种对羟基苯甲酸酯等。这些文献方法多是对一类样品基质中的几种对羟基苯甲酸酯的含量进行测定

4、，适用范围较窄。本研究建立了同时测定蔬菜、水果(经表面处理)、碳酸饮料、牛奶、醋、食品馅料等食品中6种对羟基苯甲酸酯的高效液相色谱一二极管阵列检测器的分析方法。与已报道的文献方法相比，本方法的：检出限更低，线性范围更宽，适用于同时测定各种食品基质中6种对羟基苯甲酸酯的含量。2实验部分2．1仪器与试剂1200高效液相色谱仪(DAD检测器，美国Agilent公司)；4011Digital旋转蒸发仪(德国Heidolph公司)；XH-B型振荡器(江苏康健医疗用品有限公司)；3—30K台式高速冷冻离心机(德国Sigma公司)；LC—C。。固相萃取小柱(美国SUPELCO公司)。对羟基苯甲酸(甲、

5、乙、异丙、丙、异丁、丁)酯标准品(纯度≥99．5％，夺Dr．EhrenstorferGmbH)；乙腈、甲醇(色谱纯，美国TEDIA公司)；其它试剂均为分析纯；实验用水均为二次蒸馏水。2．2样品的提取称取5．0g样品于50mL离心管中，加入2mL2mol／L乙酸铵缓冲液(pH一6．5)振荡溶解，加入2gNaCI，15mL乙腈振荡提取，再加入10mL乙腈振荡提取两次，合并提取液于旋蒸瓶中，旋转蒸发至近干，待净化。201l一08一l4收稿；2011—1l—O9接受本文系国家自然科学基金(No．20675064)，重庆市自然科学基金(No．CSTC-2009BA1003)．西南大学高新技术培育基

6、金(No．XSGX02)项目资助E-mail：yuanruo@$WU．edu．clrl53O分析化学第4O卷2．3样品的净化用2mL35％甲醇溶解上述步骤处理的残渣，并转入已用5mL甲醇，5mL水活化的LC—C。。固相萃取小柱，用3mL30％甲醇淋洗，5mL5％氨化甲醇洗脱，收集洗脱液，置于40℃氮吹仪上浓缩至干，残渣用2mL甲醇溶解振荡2min，过0．45m微孔滤膜，进行HPLC测定。2．4色谱条件AgilentC】8色谱柱(150mm×4．6mm，3．5m)；流动相：甲醇和水，梯度洗脱：0～5min，40％甲醇；5"--"15min，40％～60％甲醇；15430min，60％甲醇。

7、流速：0．8mL／min；柱温：35℃；检测器：二极管阵列检测器；检测波长：260nm；进样量：10L。3结果与讨论3．1色谱条件选择在参照文献[6-10]的基础上选择甲醇和水为流动相，等度洗脱始终不能将对羟基苯甲酸丙酯和异丙酯、丁酯和异丁酯有效分离；因此，对梯度洗脱程序进行优化，在2．4节的色谱条件下，6种对羟基苯甲酸酯得到有效分离，且灵敏度较高。6种对羟基苯甲50酸酯标准溶液的色谱图见图1。3．2提取溶剂的选择对羟基苯甲酸酯难溶