高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤

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1、高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤1材料与方法：1.1仪器：(1)高效液相色谱仪(2)分析天平，(3)酸度计，(4)离心机，(5)振荡器，(6)超纯水仪；试剂：(1)苯甲酸，(2)山梨酸，(3)脱氢乙酸，(4)甲醇；提取试剂：(1)0.3%盐酸乙醇溶液,(2)0.02mol/L磷酸氢二钾溶液1.2标准溶液的配制精密称取苯甲酸，山梨酸，脱氢乙酸对照品各适量，加乙醇溶解，配制成1.0mg/ml的标准储备溶液。1.3色谱参数和条件（1）色谱柱：DIONEXAcclaim120C18(4.6*250mm,5μm)（2）流动相：甲醇—0.02m

2、ol/L磷酸氢二钾溶液（10:90）（3）流速：1.0ml/min（4）进样量：10μL（5）检测波长：230nm(苯甲酸，山梨酸)，293nm（脱氢乙酸）1.4样品处理1.4.1固体样品（如熟肉制品.豆制品及糕点类）（1）称取捣碎混匀的样品5g(精确至0.01g)于具塞三角瓶中，（2）精密加入25ml提取溶剂，振荡1h后，于4℃放置24h，（3）离心，取上清液3ml，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45μm滤膜过滤，（4）进液相色谱仪分析。1.4.2液体样品(如冷冻饮品)（1）将样品于室温下解冻后，称取10g(精确至0.001g)于25ml量瓶中，

3、（2）用提取溶剂定容至刻度，混匀，于4℃放置24h，（3）离心，取上清液3ml，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45μm滤膜过滤，（4）进液相色谱仪分析。2数据处理2.1标准曲线与检出限精密量取标准储备溶液适量，用提取溶剂定量稀释制成每ml中含0.1μg,0.5μg,1μg,4μg,8μg,12μg,16μg,20μg的标准混合溶液，按前述色谱条件进行测定，且每个浓度做两组平行试验，以浓度C(μg/ml)为横坐标，峰面积A为纵坐标制作标准曲线；标准混合溶液的浓度（μg/ml）0.10.5148121620峰面积以浓度C(μg/ml)对峰面积A进行线性

4、回归，按信噪比3，计算检出限2.2精密度和方法回收率试验（1）精密度实验：取同一对照品溶液(各浓度均为10μg/ml)，重复进样，测出各峰面积的RSD值。相对标准偏差(relativestandarddeviationRSD)，又称为变异系数（Coefficientofvariation,C.V.），通常用百分数表示用来评价定量分析结果精密度的量度，是对同一样品多次测定结果的重复性和再现性的评价。本实验采取8次样品的结果测定而计算最后测得数据的RSD。RSD计算如下公式：其中：——标准偏差(StdDev,StandardDeviation)——n次测定值

5、的算术平均值精密度的测定通过测定多组数据而测定标准偏差来评价，本方法通过测定10μg/ml的对照品溶液测定9组，且每组做2个平行；样品名峰面积(μS*min)浓度(mg/L)精密度10μg/ml-1精密度10μg/ml-1精密度10μg/ml-2精密度10μg/ml-2精密度10μg/ml-3精密度10μg/ml-3精密度10μg/ml-4精密度10μg/ml-4精密度10μg/ml-5精密度10μg/ml-5精密度10μg/ml-6精密度10μg/ml-6精密度10μg/ml-7精密度10μg/ml-7精密度10μg/ml-8精密度10μg/ml-8精

6、密度10μg/ml-9精密度10μg/ml-9将每两组平行实验结果取平均值且通过计算出来的平均值通过excel计算出其标准偏差s样品名各组平行实验浓度平均值(mg/L)平均值标准偏差精密度10μg/ml-1精密度10μg/ml-2精密度10μg/ml-3精密度10μg/ml-4精密度10μg/ml-5精密度10μg/ml-6精密度10μg/ml-7精密度10μg/ml-8精密度10μg/ml-9=（2）回收率实验：准确度的计算通过测定加标回收率,配制一定浓度水平的混合标准溶液，按8mg/kg,10mg/kg,12mg/kg的量加入样品中,且每个浓度做3组

7、，每组均做2个平行试验，使数据更为精准。按1.4方法处理，做回收率试验样品名峰面积(μS*min)浓度(mg/L)回收率8mg/kg-1回收率8mg/kg-1回收率8mg/kg-2回收率8mg/kg-2回收率8mg/kg-3回收率8mg/kg-3回收率10mg/kg-1回收率10mg/kg-1回收率10mg/kg-2回收率10mg/kg-2回收率10mg/kg-3回收率10mg/kg-3回收率12mg/kg-1回收率12mg/kg-1回收率12mg/kg-2回收率12mg/kg-2回收率12mg/kg-3回收率12mg/kg-3未加标0.0000.000

8、0准确度的评价通过测定回收率的方法，将被测样品分为两份，其中一份加入已知量的欲测