银二氧化硅核壳增强异硫氰酸荧光素酯滤纸基质室温磷光法检测赖氨酸.pdf

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1、第4O卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第5期2012年5月ChineseJournalofAnalyticalChemistry735～739DOI：10．3724／SP．J．1096．2012．10795银二氧化硅核壳增强异硫氰酸荧光素酯滤纸基质室温磷光法检测赖氨酸杨燕朱亚先张勇(厦门大学化学化工学院化学系，厦门361005)(近海海洋环境科学国家重点实验室，厦门大学环境科学研究中心，厦门361005)摘要银二氧化硅核壳(Ag@SiOz)可使异硫氰酸荧光素酯(FITC)产生金属增强室温

2、磷光(MERTP)。当所研究体系加入赖氨酸时，其MERTP猝灭。据此，建立了检测赖氨酸的新方法。在FITC和Ag@SiO的加入量之比为1：1．5，pH=8．0时，本方法检测赖氨酸的检出限为0．270gmol／L；线性范围为1．50～90．5gmol／L，人工合成样品加标回收率为97．0％～108．0％；相对标准偏差为2．1％(一9)。本方法用于检测赖氨葡锌颗粒和赖氨酸磷酸氢钙片中的赖氨酸，结果满意。关键词赖氨酸；银二氧化硅核壳；异硫氰酸荧光素酯；室温磷光1引言赖氨酸是构成人体所有蛋白质的8种必需氨基

3、酸之一l1]。由于人体只能通过食品或药物摄取赖氨酸，其作为一种必需的营养添加剂在日常生活中有着广泛应用。因此，建立简单、快捷检测赖氨酸的方法具有实际意义。目前主要是以紫外吸收、荧光、化学发光等为检测器的色谱法检测赖氨酸[21。但赖氨酸在紫外光谱区吸收弱，自身又无荧光，所以通常要进行衍生化处理，操作复杂，耗时长。室温磷光法(RTP)具有操作简便、选择性较好等优点，但其缺点是信号强度较弱]。银二氧化硅核壳(Ag@SiO：)增强室温磷光法为该问题的解决提供了可能]。本实验基于赖氨酸猝灭Ag@SiO一异硫氰

4、酸荧光素酯(FITC)体系金属增强室温磷光(MERTP)，尝试建立简便、可行的检测赖氨酸的方法。2实验部分2．1仪器与试剂CaryEclipse荧光分光光度计(美国Varian公司)；Cary5000紫外一近红外分光光度计(美国Varian公司)；JEM一2100200kV高分辨透射电子显微镜(日本电子株式会社)；pHS一3C酸度计(上海感磁仪器有限公司)；WS70-1红外线快速干燥器(上海浦东荣丰科学仪器有限公司)；J2一MC高速冷冻离心机(美国Beckman公司)；BT25S分析天平(德国Sar

5、torius公司)。FITC、正硅酸乙酯(TEOS)、赖氨酸(分析纯，阿法埃莎上海化学有限公司)；醋酸铅、无水乙醇、硝酸银、氨水、异丙醇(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；柠檬酸三钠(分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司)；定量滤纸(杭州特种纸业有限公司)；赖氨葡锌颗粒(深圳三顺制药有限公司)；赖氨酸磷酸氢钙片(吉林省辽源亚东药业股份公司)。实验所用水均为超纯水(比电阻>18．2MQcm)。2．2Ag@SiO：的制备按文献[7]的方法制备Ag@SiO：核壳悬浮液，通过控制TEOS的用量得到壳层厚度

6、约为10nm的Ag@SiO。用乙醇洗涤3次并离心30min，纯化后，贮存于超纯水中备用。2．3溶液的配制称取0．0195gFITC，用无水乙醇溶解并定容至50．0mL棕色容量瓶中，制得1．0mmol／LFITC储备201卜0719收稿；2011—10-20接受本文系国家自然科学基金(Nos．21075102，21177102)和教育部博士点基金SRFDP(No．200803840015)资助项目E—mail：yzhang@xmu．edu．cn736分析化学第40卷液，避光低温保存备用。称取0．007

7、3g赖氨酸，用水溶解并定容至50．0mL容量瓶中，制得1．0mmol／L赖氨酸溶液，备用。称取3．793g醋酸铅，用水溶解并定容至50．0mL容量瓶中，制得1．0mol／L醋酸铅溶液，备用。2．4工作液的配制准确移取O．500mL1．0mmol／LFITC储备液于若干比色管中，分别加入0，0．250，0．500，0．750，1．00和1．25mL纯化的Ag@SiOz溶液，用pH8．0的Tris—HC1缓冲溶液定容至5．00mL，得到Ag@SiO：浓度不同，FITC浓度恒定的工作液1。准确移取O．50

8、0mL1．0mmol／LFITC溶液和0．750mL纯化的Ag@SiO溶液于若干比色管中，分别加入不同量的赖氨酸溶液(定容后赖氨酸浓度分别为：1．50，10．5，2O．5，30．5，40．5，50．5，60．5，70．5，80．5和90．5gmol／L)，用pH8．0的Tris—HC1缓冲溶液定容至5．00mL，摇匀放置15min。即得到FITC和Ag@SiO：的物质的量恒定，且赖氨酸不同浓度的工作液2。空白样不加赖氨酸。2．5样品的检测用微量进样器吸取5．o0gL1