资源描述：
《表达IFNα2b-HSA融合蛋白的CHO细胞培养基优化及发酵放大.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、化工进展2016年第35卷增刊2CHEMICALINDUSTRYANDENGINEERINGPROGRESS·311·???????????研究开发???????????表达IFNα2b-HSA融合蛋白的CHO细胞培养基优化及发酵放大蔡燕飞,李成媛,张晶晶,缪亚娜,刘克东,熊文典,陈蕴,金坚(江南大学药学院,江苏无锡214122)摘要:毕赤酵母表达的干扰素与白蛋白融合蛋白虽然避开了干扰素单体半衰期短的缺陷,但毕赤酵母对药物的糖基化修饰与人体的糖基化修饰差异性导致了药物的毒副作用。目前药物在CHO系统的表达得到了广泛应用。本研究室
2、首次构建了能表达干扰素α2b和人血清白蛋白融合蛋白(IFNα2b-HSA)的CHO细胞株。在此基础上,本研究通过对12种国产商业化基础无血清培养基和5种流加培养基进行优化筛选,获得最适培养方案:基础培养基选择最适于生长的5号培养基(M2∶M4=1∶1),流加培养基选择最有适于表达的F4培养基。在此基础上,进行5L生物反应器的发酵放大,pH为6.9~7.4,DO为40%~60%,细胞密度达到7.0×106cells/mL时,温度由37℃降温至34℃,细胞活率降至80%时停止发酵,最终融合蛋白表达量达到137mg/L。初步实现了IF
3、Nα2b-HSA融合蛋白在CHO细胞中的高密度发酵。关键词:干扰素α2b;白蛋白;CHO细胞中图分类号:TQ464文献标志码:A文章编号:1000-6613(2016)s2-0311-04DOI:10.16085/.jissn.1000-6613.2016.s2.054OptimizationofmediumforCHOcelllineexpressingIFNα2b-HSAfusionproteinandtheamplificationoffermentationCAIYanfei,LIChengyuan,ZHANGJingj
4、ing,MIAOYana,LIUKedong,XIONGWendian,CHENYun,JINJian(SchoolofPharmaceuticalSciences,JiangnanUniversity,Wuxi214122,Jiangsu,China)Abstract:ThedifferencesofglycosylationbetweenPichiapastorisandhumancausedthesideeffectsthoughthefusionproteinofInterferonandalbuminexpressed
5、inPichiapastorisavoidingthedefectsofshorthalf-lifeofmonomer.Atpresent,thedrugexpressedinCHOsystemhasbeenwidelyused.TheCHOcelllineexpressingtheinterferonalpha2bandhumanserumalbuminfusionprotein(IFNα2b-HSA)wasconstructedforthefirsttimeinourlab.Onthisbasis,chose12kindso
6、fhome-growncommercialbasicserumfreemediumand5kindsoffeedingmediumtoscreeningthemostsuitablecombination.Themostsuitabletrainingprogramis:theNo.5basicserumfreemedium(M2∶M4=1∶1)ismostsuitableforcellgrowth,theF4feedingmediumismostsuitablefortheproteinexpression.Andthenen
7、largefermentationon5Lbioreactor,theparametersareasfollows:pH6.9—7.4,DO60%—80%,coolthetemperature6from37℃downto34℃whenthecelldensityupto7.0×10cells/mL,stopfermentationwhenthecellsurvivalratedownto80%.Thefinalexpressionoffusionproteinreached137mg/L.Thehighdensityfermen
8、tationofIFNα2b-HSAfusionproteininCHOcellswaspreliminarilyrealized.Keywords:interferonα2b;serumalbumin;Chinesehamsterovarycell收稿日期:2
