常用HPV检测方法的分析.ppt

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1、常用HPV检测方法的分析HPV检测的意义HPV感染与CIN和宫颈癌变有着密切的关系HPV的检测可能对宫颈癌的预后有预测作用HPV检测对科学研究的价值常用检测方法1．细胞学检查；2.组织学检查；3．感染组织中HPV蛋白的检测；4.HPV感染的血清学检查；5.HPV基因组检测.细胞学检查传统巴氏涂片（CV）液基薄层细胞学技术(TCT)自动细胞学检测系统test，又称LCT计算机辅助细胞检测系统（CCT），优点与问题优点：操作简单，价格低廉，适宜作初步筛查；缺点：凹空细胞是HPV感染的主要形态学改变，但由于其他病毒感染

2、及人为因素均有可能造成细胞内出现空泡或凹空样变，而且细胞学检查易受取材、染色及细胞病理医生的主观判断等因素的影响，因此应用细胞病理学检测HPV存在灵敏度低、特异性差、假阴性率和假阳性率高、不能对HPV进行分型.组织学检查；肉眼观察；阴道镜观察；组织检查；优点与问题优点：操作简单，价格低廉，适宜作初步筛查；缺点：准确率低，人员素质要求高，病人痛苦程度大。感染组织中HPV蛋白的检测针对HPV抗原，主要是衣壳蛋白制备抗体，通过免疫学方法进行检测。ELISA，免疫沉淀法等。优点与问题优点：原理明确，操作相对简单缺点：由于

3、HPV至今尚不能在体外培养，且其免疫原性较弱，故血清学方法检测灵敏度较低。HPV感染的血清学检查检测人体血清中是否存在有针对HPV产生的抗体，通过免疫学方法进行检测。优点与问题优点：原理明确，操作相对简单缺点：血清学检测的对象是抗原和抗体，由于人体对HPV产生免疫应答有一定的迟滞性，所以血清学检测对无免疫应答者和HPV潜伏期感染者会产生漏检。HPV基因组检测PCR类检测方法Southern杂交法原位杂交杂交捕获法PCR类检测方法优点：该方法灵敏度高，缺点：是容易发生样品间的交叉污染，从而导致假阳性率高。另外利用该

4、方法进行HPV分型操作比较烦琐。Southern杂交法优点：该方法灵敏度及特异性均高，适用于HPV分型、HPV-DNA分子质量鉴定、基因组酶切图谱建立及物理状态研究等。缺点：其操作麻烦、耗时、费用高，且必须应用新鲜组织标本，故不宜大规模临床使用。原位杂交该法利用HPV探针与组织中的HPV-DNA杂交，首先将探针和组织中的双链HPV-DNA变性为单链，然后使探针与组织杂交.优点：利于病理学分析缺点：杂交链的稳定性不高，在杂交过程中，部分探针单链复性，使杂交率降低，影响HPV-DNA的检出率。杂交捕获法杂交捕获(hy

5、bridcapturesystem，HCS)实验是美国Digene公司新发展的一种检测HPVDNA的技术，其原理是利用对抗体捕获信号的放大和化学发光信号的检测。基本实验步骤如下：1.样本DNA双链被释放并分解为核苷酸单链;2.DNA单链与RNA探针结合为RNA－DNA杂交体;3.特异性抗体将RNA－DNA杂交体固定在试管壁或微孔壁上;4.结合有碱性磷酸酶的多个第二抗体与RNA－DNA杂交体结合,使信号放大;5.碱性磷酸酶使酶底物发光,判读光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNA－DNA杂交体的含量。杂交捕获

6、一代（HC-Ⅰ)试验可检测9种高危型HPV,包括16、18、31、33、35、45、51、52和56。所用的反应载体是试管；杂交捕获二代试验(HC－Ⅱ)原来的试管法改为96孔平板法，能同时检测13种高危型HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68)。优点：其灵敏度和特异性均较好，缺点：存在交叉污染、费用昂贵等问题利用该法进行HPV分型需要将HPV常见基因型逐个筛选才能最后确定感染的HPV型别，成本高。HPV基因芯片检测方法敏感性高、特异性强、检测结果准确可靠。有研究报道，

7、HPV基因芯片的检测灵敏度是PCR方法的100倍。操作简单：通过1次杂交检测不仅可以判断待检样品中是否存在HPV感染，而且可以鉴定出是哪种型别的HPV感染。针对性强：对样品中的HPV-DNA直接进行检测，可以检出HPV的潜伏期感染，克服了血清学及免疫组化检测法对潜伏感染会产生漏检的缺点，从而实现对疾病的早期快速诊断。同时检测多种HPV型别，对多重HPV.感染的判断一目了然，克服了其他HPV.检测方法难以判断混合感染或操作烦琐的缺点。问题成本高，芯片制作和使用需要较多昂贵的仪器，如用于原位合成寡核苷酸的光刻机器和合

8、成仪，用于合成后点样的全自动点样仪，用于信号检测的激光共聚焦扫描仪或荧光显微镜等设备，这些都成为基因芯片检测成本居高不下的重要原因，这也是制约基因芯片技术发展及应用的最主要的因素。现阶段芯片检测的灵敏度决定了需要首先扩增模板。一般采用PCR法进行这一步骤，不可避免地带来PCR所具有的局限。核酸杂交反应的特异性尚需提高。