气相色谱法快速分析人唾液中7种短链脂肪酸.pdf

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1、第44卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第7期2016年7月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1009～1O14DOI：10．11895／j．issn．02534820．150960气相色谱法快速分析人唾液中7种短链脂肪酸赵晓亚王跃飞杨帆江振作王琰杨龙潘赞红(天津中医药大学，天津市现代中药重点实验室，天津300193)(天津国际生物医药联合研究院，中药新药研发中心，天津300457)。(天津市第二人民医院，天津300192)摘要建立了气相色谱法(GC)同时检测人唾液中7种短链脂肪酸(Short．chainfattyacids，SCFAs)含量

2、的方法。唾液样品与乙醇溶液按体积比1：1混合(含0．5％(V／V)浓HC1)涡旋混合，离心后取上清液进行GC分析。采用DB．FFAP毛细管柱(30mxO．25mmx0．25m)进行分离；氢火焰离子化检测器(FID)进行检测，内标法定量。实验结果表明，唾液中共检测到7种SCFAs(乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、己酸)，7种SCFAs与内标物2一乙基丁酸的色谱峰峰面积比值与其浓度均呈现良好的线性关系(R≥0．999)，检出限(LOD，s／Ⅳ=3)和定量限(LOQ，S／N=10)分别为0．060～0．198~g／mL和0．180～0．594mL，平均加样回收率为94．8％～109．7

3、％(RSD≤4．3％)。本方法简单、快速、准确，可用于测定人的唾液中短链脂肪酸的含量。关键词气相色谱；唾液；短链脂肪酸；肠道菌群1引言短链脂肪酸(Short—chainfattyacids，SCFAs)是由益生菌，主要是肠道厌氧益生菌发酵膳食纤维和部分氨基酸和蛋白质的终产物¨，主要包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸等。短链脂肪酸不仅能为机体细胞提供能量j，同时具有抑制致病菌、抑制肠道上皮细胞和骨髓细胞的炎症反应_6等作用，并可以调节机体代谢平衡，降低炎症性肠病、肥胖和II型糖尿病等疾病的发生率J。肠腔内产生的短链脂肪酸，一部分在肠道中被利用，另一部分进入血液循环，通过细胞膜

4、和粘膜的渗透作用进入唾液，或经血液循环运输至肺部，并随呼吸作用到达口腔，进入唾液。唾液成分包括少量电解质、蛋白质、激素、DNA、RNA以及其它小分子物质。与血液和尿液等体液相比，唾液分析具有取样简单、适应性好、临床检验快速、简便等特点，且基于唾液和血液物质的相关性’“J，临床上可用于多种疾病的诊断引。唾液中含有与疾病相关的生物标记物，包括蛋白质和多肽及组织坏死、炎症、细胞粘附、结缔组织破坏和骨重塑的标记物¨。同时研究者也开始关注唾液样品中的挥发性成分并试图寻找与疾病相关的化学成分。Mueller等采用GC-TOF-MS法对吸烟和非吸烟人群的唾液进行对比分析，发现13种代谢产物含量有显著差

5、异。Sdnchez等¨采用GC-MS方法对健康人和不同类型癌症患者的唾液进行分析，揭示了二甲基二硫醚和2．乙基己醇等可能是疾病相关的生物标记物。但是对唾液中挥发性有机酸的研究鲜有报道。Chen等应用离子色谱法测定了唾液中甲酸、乙酸、丙酸和乳酸的含量，但样品处理方法过程较繁琐。本课题组在前期工作中，应用顶空气相色谱．串联质谱法鉴定唾液和血液中8种短链脂肪酸，包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、异己酸、己酸，初步推测唾液一血液中短链脂肪酸具有一定相关性。本研究建立了气相色谱．氢火焰离子化检测器法测定人唾液中7种短链脂肪酸(乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸)的定量分析方法，

6、并成功用于41例健康志愿者唾液样品的分析。本方法简单、快速、准确，为寻找唾液中与疾病相关的挥发性生物标记物奠定了方法学基础。2015—12-05收稿；2016-03-27接受本文系重大新药创制科技重大专项项目(No．2015ZX09J15102-004-004)资助E—mail：wangyuefei2OO6@hotmail．corn；jeny_pan@163．tom分析化学第44卷2实验部分2．1仪器与试剂ShimadzuGC一2010气相色谱仪(日本Shimadzu公司)；DB—FFAP毛细管柱(30mx0．25mmx0．25Ixm，美国Agi]ent公司)；Milli—Q超纯水系统(

7、美国Millipore公司)；SCIENTZ25—12超声仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)；TGL．16C高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；XS205电子天平(瑞士MettlerToledo公司)。乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、己酸、2一乙基丁酸对照品(纯度≥99％，美国Sigma．Aldrich公司)；其它试剂均为国产分析纯；实验用水为超纯水。2．2标准品溶液的配制准确称取各短链脂肪酸对照品，用50％()乙醇溶解并