基于酶-抗体共固定二氧化锆纳米信号探针的瘦肉精安培免疫传感器研究.pdf

《基于酶-抗体共固定二氧化锆纳米信号探针的瘦肉精安培免疫传感器研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第41卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第6期2013年6月ChineseJournalofAnalyticalChemistry828～834DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．21169基于酶-抗体共固定二氧化锆纳米信号探针的瘦肉精安培免疫传感器研究詹盼杜晓雯干宁林赛钗李天华曹玉廷桑卫国(新型功能材料及其制备科学国家重点实验室基地，宁波大学材化学院，宁波315211)摘要制备了基于酶一抗体共固定二氧化锆(ZrO：)纳米探针进行信号放大的盐酸特伦克罗瘦肉精(CLB)检测安培免疫传感器。首先，利用ZrO纳

2、米粒子负载葡萄糖氧化酶(Glucoseoxidase，GOD)和CLB抗体(Clen—buterolantibody，anti．CLB)，制得纳米探针(ZNPs／GOD—anti—CLBsignalprobe，简称ZNPG)。同时将聚二烯丙基二甲基氯化铵[Poly(diallyldimethylammoniumchloride)，PDDA]、氯化血红素(Hemin)和纳米金(AuNPs)层层组装到多壁碳纳米管(MWCNTs)修饰的丝网印刷电极(SPCE)表面，制得SPCEIMWCNTs／(PDDA／Hemin／AuNPs)电流型传感

3、器，可对H：O：产生还原催化电流。检测CLB时，将样品和ZNPG一起加入预先包埋好CLB的96孔板底部。样品CLB与板底CLB共同竞争结合孔溶液中的纳米探针ZNPG。反应结束后加入葡萄糖，板底ZNPG—CLB免疫复合物上的GOD催化葡萄糖氧化产生HO，可通过传感器检测。电流下降值(△，)与样品CLB成反比，可用于CLB的定量分析。由于ZNPG上具有高的GOD酶标记密度，故可以显著放大检测信号，提高检测灵敏度。在最佳条件下(pH7．0，温育时间30min，温育温度37℃)，此传感器对CLB的检测范围为0．003—100L，检测下限为1

4、ng／L，比酶联免疫分析法(ELISA)法灵敏度提高2个数量级，在猪饲料样品中进行加标回收实验，平均回收率达93．6％，相对标准偏差(RSD)小于2．5％，精密度好。同时该传感器具有可重复使用、灵敏快速，适合于食物样品中痕量CLB现场检测。关键词竞争性酶联免疫分析；瘦肉精；酶一抗体共固定二氧化锆纳米探针；信号放大；安培免疫传感器1引言盐酸特伦克罗瘦肉精(Clenbuterol，CLB)是对人类健康危害最大的非法食品添加剂之一，可对人体健康产生极大影响。因CLB可以提高瘦肉率，一些不法商贩将其添加到动物饲料中，造成极其恶劣影响。许多食

5、品检测机构已将瘦肉精列为常规检查之一_lI2J。传统的CLB分析方法包括高效液相色谱(HPLC)J、超高效液相色谱．串联质谱法(UPLC．MS／MS)J、气相色谱一质谱联用(GC—MS)等，检测虽然准确，但由于分析仪器较大，不适用于CLB现场快速分析。酶联免疫分析法(Enzyme．1inkedimmunosorbentassay，ELISA)利用抗原／抗体的特异性免疫结合，实现对目标物检测，具有特异、快速、灵敏等特点，已开始应用于痕量CLB的检测6J。传统的ELISA由于采用酶标仪检测，不仅灵敏度有限、且体积庞大，易受样品颜色干扰，

6、不适合于现场使用；而电化学分析法因其仪器便携、灵敏快速、抗杂色干扰等优点，在对食品中有害添加剂现场分析中逐渐受到青睐I8J。由于CLB无电活性，若将ELISA和电化学检测的优势相结合，将非常适合于构建食物样品中痕量CLB的在线分析技术J。葡萄糖氧化酶(Glucoseoxidase，GOD)可以催化葡萄糖产生H：O：，如将GOD和CLB抗体(Clen．buterolantibody，anti—CLB)结合构建信号探针，进而用于ELISA检测¨；由于产生的免疫复合物上连有GOD，可催化葡萄糖(Glucose，Glu)产生HO，故通过检测

7、HO即可实现CLB定量分析。而目前已有大量HO的电化学传感器报道_ll'J。研究发现，氯化血红素一多壁碳纳米管(Hemin．Multi．walledcarbonnanotubes，Hemin—MWCNTs)修饰电极可对HO产生明显的催化电流，可对其进行检测nj。由于环境水体中CLB含量极低，为进一步提高电化学免疫分析灵敏度，有必要提高信号探针上的酶标记密度。近年来，以二氧化锆(ZrO)纳米粒子(ZrO：nanoparticles，ZNPs)为代表的一些金属氧化物(如2012—11-18收稿；2012—12-25接受本文系国家自然科学

8、基金(No．30901367)、浙江省自然科学基金(Nos．LY12C20004，2011A610006，Y3110479)、宁波市科学基金(No．2011A610006)和宁波大学王宽诚幸福基金资助E—mail：ganning@nb