pH区带逆流色谱法分离纯化马钱子中马钱子碱和士的宁.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第12期2010年12月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1703—1707DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01703pH区带逆流色谱法分离纯化马钱子中马钱子碱和士的宁李嫒1’2，3刘晓“’2’3蔡皓1’2’3徐自升4蔡宝昌“，2，3，41(南京中医药大学药学院，南京210046)2(南京中医药大学国家教育部中药炮制规范化及标准化工程研究中心，南京210029)3(南京中医药大学江苏省中药炮制重点实验室，南京2

2、10029)4(南京海昌中药饮片有限公司，南京210061)摘要建立了pH区带逆流色谱分离制备马钱子中生物碱类成分马钱子碱和士的宁的方法。溶剂系统为V(甲基叔丁基醚)：V(乙腈)：V(水)=2：2：3，静置分层后，上相加入三乙胺，使其浓度为10mmol／L，作为固定相；下相加入HCI，使其浓度为10mmoL／L，作为流动相。从308mg马钱子总生物碱中分离得到50mg马钱子碱和120mg士的宁，得率分别为72．8％和85．1％；纯度分别为96．8％和98．3％。并采用LC．ESI．MS和”CNMR对目标化合物的结构进

3、行了鉴定。关键词pH区带逆流色谱法；马钱子；马钱子碱；士的宁1引言传统中药马钱子(Strychnosr91．1优一vomicaL．)为马钱科植物马钱子的干燥成熟种子。研究表明，马钱子的主要有效成分为生物碱，含量约为生药的1．5％～5．O％，其中士的宁(Strychnine)和马钱子碱(Bru—cine)约占总生物碱的80％。目前，对于马钱子碱和士的宁的分离纯化报道较少，多为传统的硅胶柱层析色谱分离方法⋯，此方法有机溶剂消耗量大，且分离周期长，无法满足高效快速制备纯品的需求。药效学的研究表明，马钱子碱是马钱子中药效最为

4、显著，且毒性比士的宁低的有效成分”J。刘建等口1采用高效液相色谱法测定了痹祺胶囊中的马钱子碱、士的宁和丹本酚酸B等成分。pH区带逆流色谱是在传统高速逆流色谱基础上发展起来的一种新型制备型分离技术。利用待分离有机酸碱的酸(碱)解离常数及疏水性的不同进行分离。与普通逆流色谱相比，其突出特点是在溶剂体系的固定相中加入保留酸(或碱)，同时在流动相中加入洗脱碱(或酸)；不同物质在被逐一洗脱出来的过程中伴随着pH值的突变。该技术可以得到最小重叠的矩形峰，同时杂质被集中在峰的两侧，具有样品分离容量大、分离纯度和分离效率高等优点【4

5、J。该法目前已经成功用于多种混合物的分离，如生物碱‘5_9】、有机酸‘10川、植物燃料¨2I、发酵产物¨31及立体异构体[14“6]等。它不仅保留了常规逆流色谱高效、固定相无污染等优点，同时又具有制备量大和快速等特点，能够满足高效快速制备化合物纯品的要求。目前，应用pH区带逆流色谱分离纯化马钱子中生物碱的方法未见报道，因此建立相关有效成分的高效分离纯化方法具有重要意义。2实验部分2．1仪器、试剂与材料GSIOA型高速逆流色谱仪(北京天宝物华有限公司)，包括HW-2000色谱工作站；8823B型紫外检测仪(北京宾达英创

6、科技有限公司)；3057型便携式记录仪；高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)；LC-10AHPLC色谱仪(日本岛津公司)；LichrospherC18色谱柱(250mm×4．6mmi．d．，5pin)，LC／MS-2020电喷雾质谱仪(日本岛津公司)；AV-500型核磁共振仪(德国Bruker公司)。氯仿、甲基叔丁基醚、乙腈(分析纯，南京化学试剂有限公司)；庚烷磺酸钠、甲酸(分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司)；KH：PO。(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；甲酸铵(分析纯，成都市科龙化工2010-05．19收

7、稿；2010-08—12接受本文系科技部“十一五”重大新药创制科技重大专项(No．2009ZX09103-342)资助项目·E-mail：bccai@12．6·corn；liuxia004_0@163．tom1704分析化学第38卷试剂厂)；乙腈(色谱纯，德国Merck公司)；实验用水为去离子水(杭州娃哈哈公司)。马钱子药材(产地：云南，批号：090218，浙江中医药大学中药饮片厂，经南京中医药大学药学院陈建伟教授鉴定为马钱科植物马钱子StrychnosM—vomicaL的干燥成熟种子)。马钱子碱和士的宁对照品(纯度

8、>99％，美国Sigma公司)。2．2样品的制备马钱子药材粉碎，过50目筛。取200g马钱子粉末用80％乙醇回流提取，提取3次，每次2h，抽滤，合并滤液，减压蒸馏得浸膏，加入pH=3的HCI溶液300mL，使游离生物碱酸化生成盐，再加入lmol／LNaOH溶液，调节至pH=11，用氯仿反复萃取5次，减压蒸馏除去氯仿，得马钱子总生物碱3．15g，