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1、噬菌体论文：福氏志贺菌血清型多重PCR分型方法的建立及应用【中文摘要】针对O抗原合成基因wzx和O抗原的修饰基因gtrI，gtrIc，gtrII，oac，gtrIV，gtrV和gtrX设计引物，以常见的14种福氏志贺菌血清型（包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、X、Xv、Y、和F6）为标准菌株，建立福氏志贺菌血清型多重PCR分型方法。方法多重PCR：根据O抗原的合成基因wzx和O抗原的修饰基因gtrI，gtrIc，gtrII，oac，gtrIV，gtrV和gtrX设计并合成引物，对常见的1
2、4种福氏志贺菌血清型（包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、Y、X、Xv和F6）建立一种多重PCR鉴定方法。有效性验证：对不同血清型的总共358株福氏志贺菌对此方法的有效性验证。结果本实验建立了针对O抗原的合成基因wzx和O抗原的修饰基因gtrI，gtrIc，gtrII，oac，gtrIV，gtrV和gtrX的一种多重PCR鉴定方法，对常见的14种福氏志贺菌血清型（包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、Y、X、Xv和F6）能有效进行分子分型，并快速、有效的鉴定。用多
3、重PCR对不同血清型的总共358株福氏志贺菌进行分析。除了8个菌株外，其余的都符合，一致率达到97.8%。那8株菌分别为Y为5株，5a为1株，X为2株。传统血清学鉴定为Y和X的菌株，多重PCR显示为2a和2b，而5a（NCTC8523）为一个新的F5。序列分析显示：5株Y中，4株是由于gtrII中移码突变引起的:1株为4个bp的删除（1197-1282），3株为1bp的删除（1031bp）。另一株有完整的gtrII，但是缺失可能存在于其他的地方。对于2株X菌株中，它们在gtrII上都有单个bp的缺失。不规则的5a，很
4、意外的发现oac基因。DNA测序显示:在oac基因上有2个bp的缺失（345-346bp）。多重PCR一次能鉴定8个基因片段，准确、快速，较传统玻片凝集法有诸多优点。结论本研究建立的福氏志贺菌血清特异性多重PCR检测方法具有准确、快速等优点，可用于临床检验和疾病监测。【英文摘要】ToexploreamultiplexPCRassaytodetectandidentify14mostcommonS.flexneriserotypes(1a,1b,1c,2a,2b,3a,3b,4a,4b,5a,5b,X,Xv,YandF
5、6)targetingtheO-antigensynthesisgenewzxandtheO-antigenmodificationgenesgtrI,gtrIc,gtrII,oac,gtrIV,gtrV,andgtrXformolecularserotypingofS.flexneri.MethodsTodevelopamultiplexPCRassay:TargetingtheO-antigensynthesisgenewzxandtheO-antigenmodificationgenesgtrI,gtrIc,g
6、trII,oac,gtrIV,gtrV,andgtrX,wedevelopedamultiplexPCRassaytodetectandidentify14mostcommonS.flexneriserotypes(1a,1b,1c,2a,2b,3a,3b,4a,4b,5a,5b,X,Xv,YandF6)formolecularserotypingofS.flexneri.Tovalidateavailability:358S.flexneristrainsofvariousserotypeswereanalyzed
7、tovalidatethemethodofavailability.RusultsThemultiplexPCRassaycontainedeightsetsofspecificPCRsinasingletubeandcanidentify14ofthe15serotypes(theexceptionbeingserotypeXv)ofS.flexnerirecognizedthusfar.Anearlyperfectconcordance(97.8%)betweenmultiplexPCRassayandslide
8、agglutinationwasobservedwhen358S.flexneristrainsofvariousserotypeswereanalyzed,exceptthat8strainswerecarryingadditionalcrypticand/ordefectiveserotype-specificgenes.Themultip
