玉米赤霉烯酮毒素标准检测规程.doc

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1、文件编号：HAMK-OI--2015版本号：1.0生效日期：2015年12月30日发放号：玉米赤霉烯酮标准操作规程1、目的为了规范亲和柱净化样本中玉米赤霉烯酮的操作流程，特制订本操作规程。2、范围本标准适用于粮食、饲料、食品中玉米赤霉烯酮的检测。3、检出限和定量限项目岛津安捷伦样本检出限（µg/kg）样本定量限（µg/kg）样本检出限（µg/kg）样本定量限（µg/kg）ZEN2.968.9675.9253.24、职责部门名称部门职责质量管理部1、负责本制度的实施。2、负责本制度的监督执行。5、程序5.1原理测

2、定的基础是抗原、抗体反应，抗体连接在柱体内，样品经过提取、过滤后，缓慢的通过玉米赤霉烯酮免疫亲和柱，在免疫亲和柱内毒素与抗体结合，之后洗涤免疫亲和柱除去没有被结合的其他无关物质。用甲醇洗脱玉米赤霉烯酮，然后注入到高效液相色谱仪中用于检测。5.2溶液配制5.2.1提取液：80%乙腈----用量筒移取800mL乙腈，加入超纯水定容至至1L。5.2.2稀释液：0.01MPBST溶液----称取8gNaCl、0.2gKCl、0.2gKH2PO4和1.16gNa2HPO4.12H2O，加入800mL超纯水溶解，加入2mL

3、Tween-20，定容至1L。5.2.3玉米赤霉烯酮标准工作液：用色谱级甲醇将储备工作液分别稀释到1000ng/ml、500ng/ml、200ng/ml、100ng/ml、50ng/ml。4文件编号：HAMK-OI--2015版本号：1.0生效日期：2015年12月30日发放号：5.3样品前处理----20g±0.01g样品（固体样品需粉碎，并过2mm分样筛）加入100mL提取液（80%乙腈-水溶液）混匀；----高速均质（≥10,000r/min）1min，或摇床（200r/min～300r/min）剧烈振荡

4、20min，用快速定性滤纸过滤，收集滤液；----取10mL滤液加入40mL稀释液稀释，再用微纤维滤纸过滤，并收集滤液作为上样液；----取25mL上样液过免疫亲和柱净化。稀释倍数：15.4净化----取出免疫亲和柱，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上；(3mL的免疫亲和柱去掉上方塞子，安装上转接头，将转接头另一端与注射器固定后使用)----将柱子与气控操作架上的注射器连接固定，取适量处理后的溶液上样；----去掉亲和柱下方堵头，调节开关，使液体以1～2滴/秒速度流出；----待液体排干后，用10mL去离子水

5、洗涤2次，流速2～3滴/秒；----待液体排干后，上样1mL甲醇，流速1滴/秒，收集洗脱液并定容至1mL；----洗脱液用0.22μm微孔滤器过滤后转移至样品瓶用于HPLC分析。*每次上样前都要将上次液体完全排干。*谷物样本也适用于GB/T5009.209-20085.5液相测定5.5.1液相色谱条件C18柱：250mm（长）×4.6mm（直径），填料粒径5μm；流动相：60%乙腈流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样体积：20µL荧光检测器：激发波长：274nm发射波长：440nm5.5.2色谱定量4文

6、件编号：HAMK-OI--2015版本号：1.0生效日期：2015年12月30日发放号：分别取相同体积样液和标准工作液注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值（峰高或峰面积），以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标做标准曲线，将未知样本中玉米赤霉烯酮的峰面积带入标准曲线，得到试样中玉米赤霉烯酮的浓度，标准品色谱图参考下图：附图：ZEN-500ppb标准品液相图谱5.6注意事项----使用前，免疫亲和柱需回至室温（22～25℃）。----亲和柱2～8℃储存，不得冻存。----不要使用过了有效日期的免疫亲

7、和柱。----取样量：根据需要可以适当增加或减少取样量，注意提取液量要相应改变。----柱容量：2000ng，当样本中待检毒素的含量除以稀释倍数高于柱容量时，需要适当降低上样液的体积，重新检测。----pH：亲和柱的上样溶液pH需在6～8之间，若偏离此范围需要用盐酸或氢氧化钠调节pH。----玉米赤霉烯酮可致癌，应戴手套操作。----使用过的容器及标准品溶液最好用次氯酸钠溶液（5%V/V）浸泡过夜。----上机检测时的溶剂与流动相保持一致，可以消除溶剂效应的影响。1、相关文件《免疫亲和柱检验标准》《免疫亲和柱检

8、验操作规程》《岛津液相色谱仪标准操作规程》《安捷伦液相色谱仪标准操作规程》2、相关记录N/A3、附件N/A4文件编号：HAMK-OI--2015版本号：1.0生效日期：2015年12月30日发放号：1、修改历史记录编号变更类型修改条款及主要内容修改人修改日期01AN/A魏丹丹2016.2.26变更类型：A–新起草M-修订4