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1、霉菌的形态观察一、实验目的1.学习并掌握霉菌形态观察j——小室培养法2.了解四类霉菌的基本形态二实验原理（molds｝是丝状真菌（filamentousfungi）的俗称,意即〃发霉的真菌"通常指那些菌丝体较发达又不产生大型肉质子实体结构的真菌。在潮湿的气候下，它们往往在有机物上大量生长繁殖。它们不仅引起食物、工农业产品的霉变或植物的真菌病害；还能将其他生物难以分解利用的数量巨大的复杂有机物如纤维素和木质素等彻底分解转化，成为绿色植物可以重新利用的养料，促进了整个地球上生物圈的繁荣发展。它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型
2、的子实体。在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，产生复什分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生抱子，不同的霉菌可产生节孑包子、厚垣翹子、抱囊抱子和分生抱子4种无性抱子，有性翹子为卵抱子、接合抱子、子囊抱子和担电子。黑曲霉和黑根霉是常见的两种霉菌,前者菌丝有隔多核，具足细胞,菌丝分化形成分生翹子梗产生无性分生抱子；后者具有匍匐菌丝与假根,菌丝分化形成抱囊梗产生无性抱囊抱子。霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）及抱子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和抱
3、子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约为3~10
4、jm）,常是细菌苗体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。可以采取直接制片和透明胶带法观察，也可以采取载玻片培养观察法，通过无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，使菌丝体在盖玻片和载玻片之间的培养基中生长，将培养基直接置于显微镜下可观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征变化。对霉菌可利用乳酸石碳酸棉蓝染液进行染色，盖上盖玻片后制成霉菌制片镜检。石炭酸可以杀死菌体以及抱子并可以防腐，乳酸可以保持菌体不变形，棉蓝使菌体着色。同时，这种霉菌制片不易干
5、燥，能防止电子飞散，用树胶封固后可制成永久标本长期保存。本实验采用载玻片培养观察法，这种方法可以保持霉菌自然生长状态。三、实验器材种：曲霉(Aspergillusniger)青霉(Penicilliumsp.)根霉(Rhizopussp)毛霉(Mucorsj.)1.溶液与试剂：PDA培养基200mL、30mL甘油2.仪器与其他用品：无菌操作：酒精灯，接种环，载玻片夹子，牛皮纸，镉子，解剖刀，吸管显微技术：普通光学显微镜,载玻片，盖玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸培养基配置：天平，滤纸，称量纸,玻璃棒,三角瓶，移液管，加热器,漏斗,
6、烧杯，纱布,培养皿10个，载玻片,盖玻片,U型玻棒等四、操作步骤%1培养小室准备及灭菌在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，在其上面放一个U型玻棒，在U型玻棒上放一块载玻片和四块盖玻片,盖上皿盖,做八个，留两个空培养皿，包扎后于121°C灭速HOmim烘干备用。%1PDA培养基的制备：将马铃薯去皮,切成块,称取?0g煮沸半小时，然后趁热用一层纱布过滤，再用六层纱布过滤,制得马铃薯汁。向制得的马铃薯汁中加糖和琼脂，加水加热溶化后,补充水至150mL#放入灭菌锅121°C灭菌30min%1琼脂准备在无菌箱中，取已灭菌的马铃薯琼脂培养基注入另两个已
7、灭菌培养皿中，使之凝固成薄层。用解剖刀切成lcm~l.2cmxlcm~l.2cm的方形琼脂块,将其移至培养小室的载玻片上，载玻片两端各放置一块。%1接种无菌操作用接种环挑取很少量的饱子接种于琼脂块的边缘上,用无菌镉子将盖玻片覆盖在琼脂块上。%1培养通过无菌操作，在培养小室中圆滤纸片上加3ml灭菌的20%甘油（用于保持湿度）,盖上盖皿,于28°C培养。%1镜检从培养箱中取出载玻片在低倍镜下观察四种霉菌菌丝体及翹子的形态特征，必要时换高倍镜。*注意事项在载玻片培养观察中，注意无菌操作，接种量要少并尽可能将分轆子接种在琼脂块边缘”避免培养后菌丝过于
8、密集影响观察。五、实验结果及分析1.绘图1.1绘图并说明霉菌的形态特征：2.根据所观察到的结果描述霉菌形态，填写表如下:菌种菌丝抱子梗着生位置抱囊繁殖（抱子）根霉菌丝无隔着生于假根着生处抱子梗顶端膨大形成有性F合子无性一M子毛霉菌丝无隔抱子梗直接由菌丝生成（无假根）鞄子梗顶端膨大形成（球形电囊）透明、球状饱子曲霉菌丝有隔气丝分化成抱子梗,着生于足细胞上抱子梗顶端膨大形成抱囊表面可辐射生出一层或两层小梗，小梗上有一串串分生抱子。青霉丝有隔无假根胞子梗顶端不膨抱子丝,多次大(无抱囊)分支形成几轮对称或不对称的小梗,小梗顶端有抱子★足细胞：菌丝与分
9、生孑包子梗交会处膨大形成，用于向曲霉的分生抱子传递菌丝中的营养3•实验图片记录：图a小室培养★四种霉菌的菌落特征青霉：菌落絮状外周边缘为白色,内层为暗绿色，不透明,
