实验六 霉菌形态的观察.doc

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1、实验六霉菌形态的观察生科15.2周罡201500181104【实验目的】1.学习并掌握霉菌的形态和观察方法2.了解四类常见芻菌的基本形态【实验原理】霉菌菌丝体由基内菌丝、气生菌丝和繁殖菌丝组成，其菌丝比细菌及放线菌粗几倍到几十倍，可以采取直接制片和透明胶带法观察，也可采取载玻片培养观察法。载玻片培养观察法即小室培养，通过无菌操作将薄层培养基琼脂置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，使菌丝体在盖玻片和载玻片之间的培养基中生长，将培养物直接置于显微镜下可观察到霉菌自然生长状态并可连续观察不同发育期的菌体结构特征变化。【实验器材】1.菌种根每马铃薯琼脂（PDA）斜面培养物，毛霉马铃薯琼脂（PDA）

2、斜面培养物，黑曲霉马铃薯琼脂（PDA）斜而培养物，青霉马铃薯琼脂（PDA）斜而培养物。2.溶液和试剂甘油，乙醇3.仪器和其他用品酒精灯，显微镜，擦镜纸，培养皿，载玻片，盖玻片，2mL移液管，接种环，解剖刀，银子，滤纸【实验步骤】1.马铃萼琼脂（PDA）培养基的配制按照附一中的配方配制lOOmLPDA培养基放入300mL锥形瓶中，加塞包好。2.培养小室准备及灭菌制作八个平皿，在每个平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一个U形管，其上放一块洁净载玻片和四块盖玻片，盖上皿盖、再与两个空平皿一起用牛皮纸包好;在100mL锥形瓶取配制好的20%的甘油50mL,加塞包好；最后取2mL移液管两支用牛

3、皮纸包好°将上述用牛皮纸包好的仪器与试剂连同配好的PDA培养基一并放入灭菌锅中110°C灭菌30min（注：由于培养基中有葡萄糖，为防止由于高温而使糖发生糊化而变质，灭菌温度不宜过高）。3.琼脂薄片的制作在无菌操作台上，取少量已灭菌的马铃薯琼脂培养基注入另两个灭菌平皿中，使之凝固成薄层。在两个凝固后的平板背部用记号笔画下约1X1的方格，通过无菌操作，用解剖刀沿画下的方格线将其切成方形的琼脂块。（注：解剖刀使用前应先在酒精中浸泡，然后在酒精灯上灼烧，冷却后再进行切割操作）4.接种在无菌操作台上，将载玻片置于U型管上，用解剖刀取一小块儿琼脂块，置于载玻片上，通过无菌操作，用接种环从斜面培养物上

4、挑取很少量的4种霉菌的抱子，接种于培养小室中琼脂块的边缘上，用无菌银子将盖玻片覆盖在琼脂块上。（注：银子与解剖刀每次使用前都应先在酒精中浸泡，灼烧冷却后再进行下一步的操作）5.培养通过无菌操作，在培养小室中圆滤纸片上加2mL灭菌的20%甘油（用于保持湿度），盖上皿盖，于28°C培养一周。1.镜检在显微镜下直接观察小室培养后的载玻片，用低倍镜即可较为清晰的观察到霉菌的菌丝体及泡子，根据所学的四种菌的基本特征对四种菌进行观察比较与区分，必要时可以采用高倍镜对菌进行观察。【实验结果】一、四种芻菌的形态特征描述1.根每：菌丝无隔，有假根及匍匐菌丝，在假根的上方直立地生长出一至数根葩囊梗，其顶端膨大

5、成球形沦子囊。囊的基部有囊托，中间有球形或半球形囊轴。囊内产大暈也囊也子，有性生殖时由不同性别的菌丝或匍匐菌丝上生出配子囊，配子囊双双异宗配合形成一接合抱子。2.毛每：菌丝无隔，无假根或匍匐菌丝，菌丝体上直接生出泡囊梗，一般单生。泡囊梗顶端膨大形成泡囊。3.曲霉：菌丝有隔，气生菌丝的一部分形成长而粗糙的分生泡子梗，顶端膨大成球状顶囊，表面辐射出一层或两层小梗，小梗上着生成串的球形分生抱子。分生抱子梗生于足细胞上，并通过足细胞与营养菌丝相连。4.青每：菌丝有隔，分生泡子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端不形成膨大的顶囊，其分生泡子梗经过多次分枝，产生儿轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，

6、称为帚状体。小梗顶端有泡子。二、绘图根霉毛霉曲每青霉附一：马铃薯琼脂(PDA)培养慕配方马铃幕葡萄糖琼脂水PH马铃薯去皮，入糖及琼脂。20g2g2glOOmL自然切成块煮沸20min,然后先用1层纱布过滤，再用6层纱布过滤，补齐水后加110C灭菌30mino