蓖麻种子毒蛋白的纯化及相关性质的研究.pdf

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1、STUDYoNTHEPURIFICATIONANDTHERELATEDPROPERTIESOFRIClNADissenationSubmittedtotheGraduateSchoolofHenanUniVersi锣inPartialFul矗11mentoftheRequirementsfortheDe铲eeofMasterofScienceBv√C锄e力K堀咒SupeⅣisor：AssociateProfWrangHon垂aoJun，2014关于学位论文独创声明和学术诚信承诺本人向河南大学提出硕士学位申请。本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立完成的，对所研究的课题有新的见解

2、。据我所知，除文中特别加以说明、标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。在此本人郑重承诺：所呈交的学位论文不存在舞弊作伪行为，文责自负。学位申请人(学位论文作者)签名：f查!丞2014年F月门日关于学位论文著作权使用授权书本人经河南大学审核批准授予硕士学位。作为学位论文的作者，本人完全了解并同意河南大学有关保留、使用学位论文的要求，即河南大学有权向国家图书馆、科研信息机构、数据收集机构和本校图书馆等提供学位论文(纸质文本和电

3、子文本)以供公众检索、查阅。本人授权河南大学出于宣扬、展览学校学术发展和进行学术交流等目的，可以采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手段保存、汇编学位论文(纸质文本和电子文本)。(涉及保密内容的学位论文在解密后适用本授权书)学位获得者(学位论文作者)签名：除无2014年厂月f1日学位论文指导教师签名：—至j埠2014年r月f1日摘要蓖麻毒蛋白(Ricin)是从大戟科(Euphorbiaceae)植物蓖麻(胄icf"“s∞掰，，l材抑括L．)中分离纯化的一种植物糖蛋白，是一种核糖体失活蛋白(Ribosome．inactivatingProtein，RJP)，具有I矾AN．糖苷酶活性，对动物细胞特别是

4、某些肿瘤细胞具有显著的杀伤作用。蓖麻毒蛋白在抗肿瘤、抗艾滋病和生物农药等方面具有较高的研究价值，是当今国际上的研究热点。本文从蓖麻毒蛋白的分离纯化、蓖麻毒蛋白作为种子储藏蛋白的研究、蓖麻毒蛋白热稳定性的研究及其抗癌活性四个方面进行了研究，主要研究内容和结果如下：(一)蓖麻毒蛋白的分离纯化：本研究以蓖麻籽为实验材料，采用水相抽提获取总蛋白，通过丙酮沉淀的方法进行蛋白质的分离和浓缩，经透析获得蓖麻毒蛋白的粗品。再利用亲和层析技术来实现蓖麻毒蛋白的纯化。经sDs．PAGE电泳分析所得蛋白质为纯品，后经肿瘤细胞杀伤实验验证所得蛋白即为蓖麻毒蛋白。本实验的创新之处在于采用了丙酮这种蛋白质变性剂进行处理，

5、既实现了蛋白质的分离和浓缩，又很好地萃取了蓖麻油，避免了蓖麻油对实验操作的影响。(二)蓖麻毒蛋白作为种子储藏蛋白的研究：利用SDS．PAGE电泳技术分析了蓖麻种子在成熟和萌发的过程中蓖麻毒蛋白的含量变化。实验结果显示，在种子的成熟和萌发阶段，蓖麻毒蛋白的含量和在总蛋白中所占的比重，呈现出明显地增加和减少，即蓖麻毒蛋白表现出的行为是积累和消耗的过程，由此证明蓖麻毒蛋白是以储藏蛋白的形式存在于蓖麻种子中的。(三)蓖麻毒蛋白的热稳定性的研究：采用M妒+、sDs、EDTA三种试剂，并以水为对照，对蓖麻毒蛋白粗品进行保温处理，通过SDS．PAGE电泳技术分析蓖麻毒蛋白的降解情况。实验发现蓖麻毒蛋白是一种

6、热稳定性非常好的蛋白质。这一结果为蓖麻毒蛋白作为抗肿瘤药物的开发提供了强有力的支持。(四)蓖麻毒蛋白抗癌活性的探究：本实验研究了蓖麻毒蛋白对肝癌细胞和食管癌细胞的杀伤作用。实验结果显示，蓖麻毒蛋白对两种癌细胞均表现出明显的杀伤作用，蓖麻毒蛋白是一种广谱的抗癌药物。关键词：蓖麻毒蛋白，分离纯化，储藏蛋白，热稳定性，抗癌活性ABSTRACTRicillisapI锄t91ycoproteillmat舶mc私tor(R把加淞∞m脚埘如L)柚euphorbiaceaeplant，itisoneoftheribosomeinactivatingpmtein(RIP)．硒cinhasRNAN唱lycosid

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