miRNA联合金纳米笼对肝癌基因治疗的初步研究.pdf

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterpreliminarystudycombinedAuNcswithomDinedAnNeswithmiRNAtothegeneRNAtherapyoflivercancerByXinGengSupervisor：YurongHuDepartmentofPharmaceuticsSchoolofPharmaceuticalScienceMay,2014原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得

2、的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：‘砺必链日期：Ⅵ?咿彤月2口日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论

3、文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：砀火链日期1勿?甲年“月C。摘要实验目的：通过联合基因治疗和金纳米笼的热疗，观察其对人肝癌细胞SMMC．7721的抑制，同时探究基因联合热疗可能的分子生物学机制，为以后对肿瘤采用多机制联合治疗的策略开阔视野和提供有价值的理论依据。实验方法：本实验使用人肝癌SMMC．7721细胞，以肝癌细胞高表达的microRNA．181为靶标，设计合成了和其完全互补的4条由23个碱基组成的anti．

4、miR-181a、anti．miR-181b、anti—mi．181c和anti．mi．181d。LipofectaminTM2000为转染试剂转染人肝癌SMMC．7721细胞，采用流式细胞仪检测优化转染条件，SRB法观察不同anti．miR-181序列对人肝癌SMMC．7721细胞生长的抑制作用；通过PI单染法检测筛选出的有效序列anti．miR．181b对细胞周期的影响；AnnexinV-FITC／PI双染法检测anti-miR-181b对细胞凋亡的诱导作用；以筛选的有效序列anti．miR-181b作为治疗药物，相变材料1．14醇和an

5、ti．miR-181b混合均匀，DSC分析14醇对anti．miR．181b的影响，紫外分光光度计检测14醇和anti-miR-181b的最佳体积比，在体外通过加热或者超声研究混合物的稳定性和释药特性，同时观察加热对细胞生长情况的影响以及anti．miR-181b在加热状态下的活性；筛选的PCM．anti．miR-181b混合物包封于金纳米笼中，根据相关公式计算包封率和十四醇所占金纳米笼的体积，激光加热使anti．miR-181b释放，采用SRB法观察载药金纳米笼、阴性对照、空白金纳米笼对细胞生长的抑制作用。实验结果：本实验合成了4条anti

6、．miR．18l序列，从中成功筛选出一条抑制效果较好的有效序列anti．miR-181b；anti．miR-181b转染肝癌细胞SMMC．7721后，能抑制肝癌细胞的生长，使细胞周期发生阻滞，诱导细胞凋亡，具有良好的体外抗肝癌作用，为肝癌的基因治疗提供了扎实的实验基础；PCM．anti-miR-181b最佳混合比为2：1，DSC分析1．14醇的加入不会使anti．miR．181b的性质发生改变，混合物于4℃放置一个月性质稳定，加热对细胞生长并无影响，同时不会影响anti．miR．181b的活性，可以用于热疗；合成的金纳米笼性质稳定可用于载药，

7、摘要整个金纳米笼包裹了53％的1．14醇，每个金纳米笼中载有的anti．miR-181b摩尔数为：3．06x10。25mol／eage，温度加热到40℃，anti．miR-181b能够很明显的释放出来，而在常温和37℃时anti．miR．181b几乎不会释放。SRB实验发现，AuNCs．anti．miR-181b作用24、48和72h后对SMMC．7721细胞的抑制率分别为30．457+1．56％、33．257+1．37％和27．490-A：1．19％。实验结论：金纳米笼是一种无毒有效的基因递送载体，同时联合基因治疗肝癌有一定的治疗效果。关键

8、词：miRNA；肝癌；基因治疗；金纳米笼Ab§心actAbstractObjective：AccordingtothegeneandAuNanocagestoget