课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段.pptx

《课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段.pptx》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、多聚酶链式反应扩增DNA片段主讲：陈倩多聚酶链式反应扩增DNA片段一、基础知识（一）DNA的分子结构（二）DNA复制（一）PCR扩增的原理及条件二、PCR技术1.原理：即复性2.条件：3.方法：DNA受热变性解旋为单链，冷却后引物与单链相应互补序列结合，在DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。（二）PCR反应过程1.步骤2.方向3.过程90-95度55-60度70-75度写出第一次复制与第二次复制的PCR产物4.结果1个DNA分子经过n次循环后，可以产生______个DNA分子其中含有引物1的DNA分子

2、有______个含有引物2的有_________个同时含有引物1和引物2的有______个2n2n-12n-12n-2酶、能量、温度三、实验操作四、注意事项1.隔离操作区所用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水等在使用前必须经过高压灭菌。2.缓冲液分装成小份，-20度保存3.每添加一种成分要记得更换枪头4.混匀后离心处理，使反应液在离心管底部五、结果分析与评价为什么PCR技术中不使用解旋酶和ATP？PCR技术是一种体外进行DNA复制的方法,通过在一定的条件下控制温度即高温变性、低温退火和适温延伸等几步

3、反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增。在DNA复制过程中是通过在高温条件实现DNA解旋，所以不需要解旋酶，而且如果使用了解旋酶会使DNA一直处在单链的状态，反而会破坏复制过程的循环性；复制的过程本来是需要能量的，但是在PCR反应体系中加入的并非是普通的4种脱氧核苷酸，而是4种脱氧核苷三磷酸即dATP，dTTP，dGTP，dCTP，它们分别由4种脱氧核苷酸在消耗ATP的基础上活化形成的，所以它们能提供PCR反应需要的能量，所以在PCR过程中，不需要加入ATP。