《细胞化学技术》PPT课件.ppt

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1、第二节细胞化学技术(Cytochemistry)在保持细胞结构完整的条件下,借助细胞中的化学反应,研究细胞和细胞内的细胞器的结构、功能关系的一种技术。一、酶细胞化学技术通过酶的特异细胞化学反应来显示酶在细胞内的分布及酶活性强弱的一种技术。二、免疫细胞化学技术(Immunocytochemistry)利用抗原和抗体的结合具有高敏感性和特异性的特点,用已知的经过标记的抗体检测组织与细胞中相应抗原的方法。常用的标记方法:1)荧光标记:异硫氰酸荧光素(FITC)、罗丹明2)酶标记:辣根过氧化物酶(HRP)3)铁蛋白标记:铁蛋白是含铁离子的蛋白质,在电

2、镜下铁离子可显黑色4)胶体金标记:即金的水溶液,具有一般溶液的特性,用它与抗体标记后,经抗原抗体反应可定位抗原的存在。免疫铁蛋白电镜技术免疫胶体金电镜技术免疫荧光显微镜技术(Immunofluorescencemicroscopy)荧光素标记抗体的方法:直接法:荧光素直接和第一抗体相偶联优点:简单方便,易于操作,省时省力缺点:敏感度不够,特异性不强,标记抗体需自己制备间接法:荧光素先和第二抗体(抗第一抗体的抗体)偶联,再与第一抗体作用优点:敏感度高,特异性强,可购买不同的标记二抗缺点:操作比直接法复杂三、放射自显影术(autoradiogra

3、phy)放射性核素在蜕变过程中发出带电粒子可使感光材料感光。利用这样的特性,用放射性化合物脉冲标记活细胞,经固定、切片后在暗处把感光乳胶覆盖于切片上,在此期间,由于放射性同位素衰变使乳胶曝光,经显影、定影,根据银粒所在部位,就可知道细胞中放射性物质的分布。

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