无菌操作技术—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制.doc

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1、无菌操作技术一器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制无菌操作技术（一）一器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制实验目的：1、掌握实验用器皿的清洗、包扎方法2、了解常用的灭菌方法一干热灭菌、湿热灭菌、紫外线灭菌及化学灭菌3、掌握培养基的配制及不同类型灭菌器的使用。一、实验用器皿的清洗及洗涤液的配制1＞洗涤液的种类及配制（1）去垢剂溶液（常用洗涤液）。生化去垢剂（detergent）A.中性去垢剂又称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。一般市售有聚乙二醇类,如PEG200；多元醇类表面活性剂，如山梨醇、司班和吐温类：司班・80和吐温・2

2、0B.阴离子去垢剂:常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠。常用于核酸的提取。A.阳离子去垢剂：如洁尔灭、新洁尔灭、消毒净等，消毒灭菌类居多。B.天然表面活性剂：又称为生物表面活性剂，如各种树胶邙可拉伯胶、果胶）、明胶、皂貳、卵磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、多糖类（如环糊精）等。C.两性表面活性剂：在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质，起泡性好，去污力也强;在酸性溶液屮则呈现阳离子表面活性剂特征，其杀菌性很强。（2）銘酸洗液：［乂称重珞酸钾（或钠）一一浓硫酸洗涤液，简称洗液］广泛用于玻璃仪器的洗涤。其配制方法如下：%1称取5g重鎔酸钾（或钠）粉末放入250ml

3、烧杯中，加5ml水，尽量使其溶解。然后边搅拌，边缓缓注入浓H2SO4l00ml,待洗液温度冷却至40°C以下，将其转移到具玻塞的细颈干燥的试剂瓶内贮存备用。%1称取10g重鎔酸钾粉末置于500ml烧杯中，加水20ml,尽量使其溶解。然后慢慢注入浓H2SO4180ml,随加随搅拌。冷却后贮于具玻塞的细颈试剂瓶中备用。（3）浓HCI（工业用）常用于洗去水垢或某些无机盐沉淀。（4）浓HNO3（常用于洗涤除去金属离子）。（5）lmol/LKOH溶液。（6）8mol/L尿素洗涤液（PH1.0）适用于洗涤盛蛋白质溶液及血样的器皿。（7）10-3mol/LEDTA溶液用于除去

4、塑料容器内壁污染的金属离子。（8）5%-10%磷酸三钠（Na3PO4•12H2O）溶液（用于洗涤油污物）。（9）氢氧化钾（KOH）的乙醇溶液和含有高猛酸钾的氢氧化钠（NaOH）溶液，适用于清除容器内壁污垢，但这两种强碱性洗涤液对玻璃仪器的侵虫性很强，故洗涤时间不宜过长，使用时应小心慎重。（10）有机溶剂：丙酮、乙醇、乙瞇等可用于洗脱油脂、脂溶性染料等污痕。二甲苯可洗脱油漆类污垢。12.玻璃仪器的清洗（1）初用玻璃仪器的洗涤新购置的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用去垢剂（0.5%水溶液）或肥皂水洗刷，再用自來水洗净。然后浸泡1%—2%HCI溶液中过液，次

5、日取出用自来水充分冲洗，最后再用蒸憾水漂洗数次，置烘箱内烘干或倒置晾干备用。（2）使用过的玻璃仪器的洗涤%1一般玻璃仪器洗涤自來水冲洗一去垢剂洗涤或浸泡于0.5%去垢剂水溶液中一将器皿内外（特别是内壁）仔细刷洗后一自来水充分洗净一蒸憾水漂洗数次，烘干或晾干备用。凡洗净的玻璃器皿，其壁上不沾冇水珠，否则表示尚未洗净，应按上述方法重新洗涤。量具玻璃仪器不能烘烤，只能晾干或风干%1移液管（吸量管）的洗涤移液管每次使用后须及时用流水冲洗或浸泡于冷水中，特别是吸取粘滞性较大的液体（全血、血浆、血清等）后应立即用流水充分冲洗，以免物质干涸和堵塞移液管。通常使用过的移液管经自

6、來水冲洗后，可浸泡于0.5%去垢剂溶液中或鎔酸洗液中过夜（不少于4h）,然后分别用自来水充分冲洗和蒸憾水漂洗，晾干备用。%1玻璃比色皿和石英比色皿的清洗比色皿使用后应立即用蒸憾水充分冲洗，倒置在清洁处晾干备用。所有比色皿均可用0.5%去垢剂溶液洗涤，必须用脱脂棉小心地清洗，然后用大量蒸憎水充分漂洗干净，倒置晾干。但不能用氢氧化钾的乙醇溶液及其他强碱洗涤液清洗比色皿，因这样导致比色皿的严重腐蚀。2.塑料器皿的洗涤新购买的塑料器皿：自來水清洗后f8mol-L-1尿素溶液（PH1.0）洗涤，一蒸憾水漂洗一lmol/LKOH溶液洗涤一蒸馆水漂洗一10・3mol/LEDT

7、A溶液洗涤，以除去污染的金属离子一双蒸憾水充分漂洗，倒置晾干备用。使用后塑料器皿：0.5%去垢剂溶液洗涤一自来水充分冲洗和蒸憾水漂洗晾干后即可使用。如果必要也可按碱一尿素〜EDTA洗涤顺序处理，以除去器皿上的污染物。二、常用灭菌方法：干热灭菌：在干燥环境（如火焰或干热空气）进行灭菌的技术。一般有火焰灭菌法和干热空气灭菌法火焰灭菌：指用火焰直接烧灼的灭菌方法。该方法灭菌迅速、可靠、简便，适合于耐火焰材料（如金属、玻璃及瓷器等）物品与用具的灭菌,不适合药品的灭菌。干热灭菌：该法适用于耐高温的玻璃和金属制品以及不允许湿热气体穿透的油脂（如油性软膏机制、注射用油等）和耐

8、高温的粉末化学药品的灭菌