实验二培养基配制相关器皿的包扎及消毒灭菌张理珉

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1、实验二培养基配制、相关器皿的包扎及消毒灭菌本次实验的目的和要求明确培养基制备原理通过对培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤了解消毒、灭菌的原理及方法，掌握干热灭菌和高压蒸汽灭菌学习并练习相关器皿的包扎方法实验内容一培养基及无菌水的制备一、培养基的相关知识介绍1、培养基的定义和组成培养基：指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养基质（定义中反映了培养基的2个作用？）。包括六大营养要素：碳源、氮源、无机盐、生长因子、能源、水。2、培养基制备原则和方法四个原则：目的明确；营养协调；物理化学条件适宜；经济节约。C/N：指在微生物培养基中所含的碳源中碳原子摩尔数与氮源中

2、的氮原子摩尔数之比。四种方法：生态模拟；参阅文献；精心设计；试验比较。3、物理化学条件适宜的说明pH值：渗透压和水活度（aw）：在同温同压下，某溶液的蒸气压（P）与纯水蒸气压（P0）之比。氧化还原电位：针对厌氧菌分离特别需要注意（常加入半胱氨酸、巯基乙醇酸钠等？）。4、培养基的分类⑴按成分分——对成分种类、量是否清楚天然培养基合成培养基（组合培养基）半合成培养基（也称半组合培养基）⑵按物理状态分固体培养基（凝固剂的使用量较高；天然固体基质的使用）半固体培养基（凝固剂使用量较低）液体培养基（工业生产中的重要性）脱水培养基（也称预制干燥培养基）（3）按培养基对微生物的功能分基础培养基：含有一

3、般微生物生长繁殖需要的基本营养物质。——各种微生物不相同。选择性培养基：根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基，具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种筛选等领域。“投其所好、取其所抗”。——高通量筛选的建立（排他）。鉴别性培养基：在培养基中加入有能与目的菌的无色代产物发生显色反应的指示剂，从而达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。——直观、专一性（伊红美兰培养基，EMB）。大肠杆菌在EMB培养基上的形态二、培养基的配方一个实验班共配置3种固体培养基：牛肉膏蛋白胨培养基高氏1号培养基马丁氏培养基按照老师的划分进行

4、，每个实验小组都要准备，几个实验小组配1种培养基，供全班使用。1、牛肉膏蛋白胨培养基——500ml/组（分离、培养细菌用）牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g水1000ml琼脂15～20gpH7.4～7.6可溶性淀粉20gNaCl0.5gKNO31.0gK2HPO4·3H2O0.5gMgSO4·7H2O0.5gFeSO4·7H2O0.01g琼脂15～25g水1000mlpH7.4～7.6临用时无菌操作在800ml培养基中加入3%的K2Cr2O7溶液1ml2、高氏1号培养基——500ml/组（分离、培养放线菌用）KH2PO41gMgSO4·7H2O0.5g蛋白胨5g葡萄糖10g

5、琼脂20g水1000mlpH自然配好后在此培养基中，按1000ml加入1%孟加拉红水溶液3.3ml。临用时以无菌操作在100ml培养基中加入1%的链霉素0.3ml，使其终浓度为30ug/ml。3、马丁氏培养基——500ml/组（分离、培养真菌用）三、培养基配制的步骤1、计算按照配方要求（一般为1000ml的量）和实际配制培养基的量，计算出不同组分需要的量。2、称量、溶解按培养基配方在三角瓶中先加水（如无加入后大幅度改变原体积的物质，可以把水加足），然后依次准确称取各药品并分别逐一溶解于其中（琼脂需加热溶解），最后补充水到所需体积。（注意：各成分之间发生化学反应产生不溶的沉淀；培养基成分

6、中有影响pH试纸的显色的物质，调pH值后再加入）3、调pH用5~10%NaOH、1~5%HCl溶液将培养基的pH调到所需范围，根据需要用精密pH试纸或pH计来确定。4、包扎（有一定规范要求）5、灭菌（高压蒸汽灭菌：121.3℃,15～30min）四、培养基配制过程中需注意的事项先加水——易产生沉淀逐一溶解——易产生沉淀调节pH——容易忘记加塞灭菌（或过滤除菌）——即时灭菌煮过或加热过的培养基，注意水的蒸发损失——容量补足五、培养基配制中的2点说明1、量微的药品（天平无法称量），以溶液形式加入（先配制成一定浓度的溶液）；2、粘稠的药品和物品，称好后与称量纸一起放入溶液中，待药品溶解后取出称

7、量纸；或利用减称量法完成（从总药品量中以减量称出所需要的量）。六、无菌水的准备——经灭菌处理后的蒸馏水或自来水。1、量取90mL蒸馏水在250mL三角瓶，内加玻珠1瓶2、吸取9mL蒸馏水在18*180试管中5支包扎后灭菌。注意！！标记（记号笔）写在器皿壁或外包装纸上（如还需要高压蒸汽灭菌，只能写在外包装纸上）；不要直接写在瓶（管）塞或包装棉布上。实验内容二消毒与灭菌一、消毒、灭菌的定义和常见方法消毒：指消灭病原菌和有害微生物的营养体