实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌

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1、实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌一、实验目的1学会常用器皿包扎方法2学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤3学会实验室灭菌锅的使用方法二、常用器具和仪器试管（testtube），德汉氏小管（Durhamtube），玻璃吸管（glasspipette），吸器，微量加样器（micropipette），吸嘴（tip），培养皿（petridish），三角瓶（erlenmeyerflask），接种铲（inoculatingshovel），玻璃涂布器（glassspreader），接种环（inoculatingloop），接种钩（inoculatingho

2、ok），接种针（inoculatingneedle），小塑料离心管（Eppendorftube），滴瓶（dropperbottle），双层瓶（doublebottle），酒精灯(alcoholburner），煤气喷头（coalgassprinklerhead），试剂瓶，量筒，烧杯，温度计，石棉网，漏斗，烘箱，卧式灭菌锅，手提式灭菌锅，无菌操作台/室，过滤除菌设备，厌氧操作设备，小型发酵罐，离心机，培养箱/摇床，冷冻干燥机，蒸馏水器，超声波清洗仪，磁力搅拌器。三、玻璃器皿的包装1、培养皿的包装方法一：用旧报纸密密包紧，一般以5-8套培养皿作一包。包好

3、后用干热或湿热灭菌（见无菌操作技术）。方法二：将培养皿放入金属（不锈钢）筒内，干热灭菌。金属筒配有盖子，内部还有一个可以放培养皿的带底框架。框架可以从筒内提出，以便装取培养皿。包好的培养皿金属筒和内部的框架塑料培养皿架2、吸管的包装准备好干燥的吸管，在粗头端塞入一小段棉花，以免使用时将杂菌吹入或不慎将微生物吸出。将吸管尖端斜放在旧报纸的近左端，与报纸成45°角，左端多余的一段覆折在尖头上，再将整根吸管卷入报纸，右端多余的报纸打个小结。包好的吸管再用一张大报纸包好，干热灭菌。或一起装入专用吸管筒进行灭菌。如果一次可以用完，也可以将吸管直接装入筒内。尖

4、端向内，使用时将筒平放在桌面上，手持粗端抽出。3、试管和三角瓶的包装试管管口和三角瓶瓶口塞以棉花塞或泡膜塑料塞，然后在外面用两层报纸包好，并用细线扎紧。若用铝箔更好，可以不用线扎。进行干热或湿热灭菌。4、棉塞的制作：棉塞的作用主要是防止杂菌污染和保证通气良好，所以好的棉塞应该形状、大小和松紧与试管口或三角瓶口完全适合。加塞时，棉塞长度的1/3在管口（瓶口）外，2/3在内。一般用纤维长的棉花做塞子，不用脱脂棉，因为脱脂棉易吸水变湿，造成污染。此外，液体培养中还经常用到通气塞，即8层纱布重叠而成，或在两层纱布间均匀铺一层棉花作成。四、玻璃器皿的清洗新玻

5、璃器皿：用2%盐酸浸泡数小时后用自来水冲洗干净；使用过的玻璃器皿：试管、培养皿、三角瓶等：用瓶刷沾去污粉等洗涤剂刷洗，再用自来水冲洗干净；装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤；玻璃吸管：使用后投入有自来水的大量筒或标本缸内，以免干燥后不易清洗，再集中用自来水冲洗。载玻片和盖玻片：滴加过香柏油的玻片要先用软纸沾二甲苯擦去油，在肥皂水中煮沸5-10min，用软布或脱脂棉擦拭后用自来水冲洗。然后在稀洗液中浸泡2h，再用自来水和蒸馏水冲洗晾干后浸于95%乙醇中备用。注意：带菌的器皿在洗涤前用2%煤酚皂溶液或0.25%新洁尔灭溶液等消毒液内浸泡24h或

6、煮沸30min，再洗涤；带病原菌的培养物先进行高压蒸灭菌，然后倒去培养物，再洗涤。五、培养基的配制与灭菌牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g．NaCl5g，琼脂15-20g，水1000mL，pH7.4-7.6。1称药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，牛肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。2加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，

7、小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。3调PH：检测培养基的PH，若pH偏酸，可滴加1滴1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用1mol/LHCl进行调节。pH的调节通常放在加琼脂前。应注意pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。4过滤：液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果的观察。5分装：按实验要求，可将配制的培

8、养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免培养基沾在管口或瓶口上面造成污染。分装量：固体培养基约为试管高度的1／5，