基因克隆与表达finalZJJ.ppt

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1、基因的克隆与表达张静静2011-09-24业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636基因克隆(genecloning)RACE技术服务基因表达(geneexpression)-原核基因表达-真核基因表达业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636基因克隆GeneCloning业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636概述克隆载体受体细胞体外重组的策略基因克隆工作流程业务员QQ807

2、475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636一、概述确定了遗传信息的携带者揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理提出了中心法则和操纵子学说，破译了遗传密码概述业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-587176361973年Cohen完成第一个基因工程实验经体外重组获得杂合DNA杂合子转化入大肠杆菌所需元件：限制性内切酶连接酶载体受体细胞业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636----通过体外重组技

3、术,将一段目的DNA经切割、连接插入适当载体，并导入受体细胞，扩增形成大量子代分子的过程。基因克隆（分子克隆molecularcloning）业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636基因克隆的核心-----体外重组(Recombination):人工将一段目的DNA插入一个载体的过程。业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636基因克隆的技术路线目的基因载体体外重组重组子（杂合DNA）转化受体细胞筛选阳性克隆大量扩增，获得子代DNA

4、业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636二、克隆载体复制基因(replicator)选择性记号克隆位点业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636三、受体细胞1、定义：外源DNA导入的细胞，是重组体扩增的场所。2、要求：易于接纳外源DNA无特异的内源性核酸内切酶载体复制、扩增不受阻与载体有互补性业务员QQ807475538公司网址：www

5、.biokit.cn客服电话010-58717636四、体外重组的策略粘-粘连接：最有效、最快捷业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-587176364、T-A克隆T-vector两条链的5’端含有一个游离的TPCR过程中，普通的Taq酶可在产物的3’端多加一个A业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636五、基因克隆的工作流程（一）目的基因的获得（二）体外重组（三）转化—Cacl2法、电击法（四）重组子的筛选及鉴定1、筛选：平板法（抗生素、蓝白

6、斑）2、鉴定：长度鉴定：酶切、PCR（五）测序业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636样品的要求目标基因序列（最好附原始测序报告）；克隆模板（包括：菌液、质粒、PCR扩增产物、RT-PCR扩增产物、从其他质粒上酶切得到的DNA片段等）及检测结果和背景资料；载体及其图谱（常用载体可由我方免费提供）；注明克隆要求，克隆使用的酶切位点。业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636服务流程载体构建流程为：酶切、凝胶回收、连接、转化、鉴定、测

7、序。业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636完成时间2周内完成。业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636最终产品构建好的重组质粒，不少于1μg；含有重组质粒的菌株；电泳图谱，测序图谱，酶切图。业务员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636快速扩增cDNA末端—RACE技术背景RACE的基本概念不同厂家RACE试剂盒的介绍RACE技术的关键环节存在的问题及解决办法最终产品的要求业务

8、员QQ807475538公司网址：www.biokit.cn客服电话010-58717636技术背景得到某基因的片段、全长或近全长cDNA的方法：建立和筛选cDNA和DNA文库。利用GenBa