液质分析条件的优化策略课件.ppt

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1、液质分析条件的优化策略（简化板）液相色谱与液质联用仪使用的要点质量校正的正确对于相关分析要有合适的支持软件（Maxnet，TargeLyness）合适的液相色谱平台合适的质谱接口方式液相色谱分析中合适的色谱柱的选用质谱检测模式的选择必要的后液流补充质量校正的正确（Myoglobin校正）质量校正的正确（Myoglobin校正）质量校正的正确（CsI校正）的肽测定质量校正的正确（CsI校正）的蛋白测定质量校正的关键点针对不同的分析采用不同的校正，一般蛋白质采用Myoglobin，对于小分子分析建议采用CsI校正。对于采用Myoglobin校正的建议采用高次方的校正曲

2、线（3-4）；对CsI校正的建议采用低次方的校正曲线（1-2）合适的液相色谱平台能提供一个连续、稳定的液流环境真空脱气设备系统的死体积尽可能小，减少管路的长度输液泵的设计能适用于微径柱的要求二极管阵列检测器的池体积与质谱仪匹配必要的液相色谱辅助配件必要的液相色谱与质谱仪的软件操作平台合适的液相色谱柱柱内径：2.1mm柱长度：根据分析的目的选择50mm或150mm柱填料选用新型的填料：Symmetry，Discovery，Vydac，Zorbax，Xterra，Intersil，Diamonsil等LC/MSFlowInjectionAnalysisofPeptide

3、sandProteinsbyReversed-PhaseHPLC1.0%HOAcminAbundance10.0012.0014.0016.002.004.006.008.00500001000001500002000002500000.2%TFA2.004.006.008.0010.0012.0014.0016.0050000100000150000200000250000minAbundanceReverse-PhaseLC/MSSolventsACN,MeOH,H2O,IsopropanolNormal-PhaseLC/MSSolvents(forAPCI-M

4、S)Hexane,MethyleneChloride,Acetone,EthanolCompatibleLC/MSBuffersandModifiers:Formicacid,aceticacid,ammoniumacetate,ammoniumformate,ammoniumhydroxide,trifluoroaceticacidTFAconcentrationshouldbe<0.1%v/vKeepvolatilebufferconcentrations<20mMtominimizeESIionsuppressionAvoidNon-volatileBuffe

5、rsAlkali-metalphosphates,borates,etc.SuitableSolventsforLC/MSVolatilebuffer–minimizeinstrumentdowntimeBufferconcentration:HighionsuppressiondecreasesESIsensitivityLowsystemadequatelybuffered?pHrangepermittedbystationaryphaseMethanoloracetonitrileStartwithacetonitrile01111ChangeRetent

6、iontoImproveResolution–SelectSolvents/ModifiersthatareMSCompatibleUsefulpHRangesforVolatileBuffersBuffersnormallyusedinLC/MS:01094BufferpKapHrangeFormate3.82.8–4.8Acetate4.83.8–5.89.28.2–10.2Triethylamine11.010–12Diethylamine10.59.5–11.5???Ammonia76–8BufferConcentrations/Additiveamoun

7、ts:10to50mMformic,aceticacids0.01-1%v/vtrifluoroaceticacid<0.1%v/valkylaminetypebases<0.1%v/vEffectofBufferonAnalyteResponsePhosphatebufferssuppresstheMSresponseofcaffeineatallpHsandalsotheMSresponseofOxazepamatpH8.Volatilebuffers(formate,acetate,ammonia)generallyprovidegoodresponses