无菌检查用培养基适用性验证报告.doc

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1、制药有限公司文件文件编号：VR-03-49页码：7/8无菌检查用培养基适用性验证报告审核批准表O方案经下列部门审核和批准后生效项目职责姓名签字日期起草质保部质保部审核质保部长批准质量副总制药有限公司文件文件编号：VR-03-49页码：7/81.验证目的：为证明硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适合于细菌，真菌的无菌检查，总结本验证报告。2.参照标准：《中国药典》2010版二部附录XIH无菌检查法。3.验证项目：硫乙醇酸盐流体培养基、营养肉汤、改良马丁培养基适用性检查。姓名部门职责质保部负责对验证进行总结和评价批准方案及报告质保部负责制定确认方案及报告的编制质

2、保部负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠质保部负责确认过程的相关检测，确保检验结论正确可靠4.验证小组4.试验材料：4.1.被验证培养基：品名：硫乙醇酸盐流体培养基规格：批号：生产厂家：品名：营养肉汤培养基规格：批号：生产厂家：品名：改良马丁培养基规格：批号：生产厂家：4.2.仪器设备：4.2.1.压力蒸汽灭菌器：型号：编号：4.2.2.双人净化工作台：型号：编号：4.2.3.电热鼓风干燥箱：型号：编号：4.2.4.生化培养箱(23～28℃)：型号：编号：4.2.5.恒温培养箱(30～35℃)型号：编号：4.3.稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液制药有限公司文件文件

3、编号：VR-03-49页码：7/84.4.验证用培养基：名称生产厂家批号营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基4.5.验证用菌株：验证菌株代次培养基培养温度培养时间（小时）金黄色葡萄球菌CMCC（B）2600330～35℃18～24铜绿假单胞菌CMCC（B）1010430～35℃18～24枯草芽孢杆菌CMCC（B）6350130～35℃18～24生孢梭菌CMCC(B)6494130～35℃18～24白色念珠菌CMCC（F）9800123～28℃24～48黑曲霉菌CMCC(F)9800323～28℃5～7天5.菌液制备：5.1.取经培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞

4、菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。5.2.取经培养24～48小时的白色念珠菌的改良马丁培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至小于100cfu∕ml的菌悬液备用。6.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）分别取上述制备的金黄色葡萄糖球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml加入培养皿，每种菌液平行做2皿，注入不超过45℃营养琼脂培养基15～20ml，置30～35℃培养箱培养二天，取上项制备的白色念珠菌菌液1ml加入培养皿，平行做2皿，注入不超过45℃的玫瑰红钠琼

5、脂培养基约15～20ml，置23～28℃培养箱培养三天。7.无菌培养基的无菌性检查7.1培养基的配制硫乙醇酸盐流体培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基29.25g，加1L蒸馏水，加热煮沸使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml，121℃灭菌15min。制药有限公司文件文件编号：VR-03-49页码：7/8营养肉汤培养基的配制：取营养肉汤培养基18g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml，121℃灭菌15min。改良马丁培养基的配制：取改良马丁培养基28.5g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到到试管中，每只试

6、管装量9ml，121℃灭菌15min。7.2培养基的培养硫乙醇酸盐流体培养基和营养肉汤培养基5支，置于30～35℃的培养箱中培养14天；改良马丁培养基5支，置于23～28℃的培养箱中培养14天℃，逐日观察情况。培养基名称管数培养时间（天）备注1234567891011121314硫乙醇酸盐流体培养基12345营养肉汤培养基12345改良马丁培养基12345结论表1培养基的无菌性检查表注：“+”为生长，“-”为不生长7.培养基灵敏度检查7.1.硫乙醇酸盐流体培养基等灵敏度检查至少应进行3次独立的平行试验。7.2培养基的配制制药有限公司文件文件编号：VR-03-49页码：7

7、/8硫乙醇酸盐流体培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基29.25g，加1L蒸馏水，加热煮沸使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml，121℃灭菌15min。营养肉汤培养基的配制：取硫乙醇酸盐流体培养基18g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到试管中，每只试管装量12ml，121℃灭菌15min。改良马丁培养基的配制：取改良马丁培养基28.5g，加1L蒸馏水，加热搅拌使其完全溶解，摇匀分装到到试管中，每只试管装量9ml，121℃灭菌15min。7.3.培养基接种取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基9支，分别接种