新版GMP培养基适用性检查验证报告.doc

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1、培养基适用性检查验证报告文件编号：VMP-VV-501REP-00起草人：审核人：批准人：批准日期：年月曰1•概述通过验证以确认所采用的培养基适合于细菌、霉菌及酵母菌的测定及控制菌的检查，根据特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。2.验证目的及范围为了确认所采用细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查的培养基是否符合微生物限度

2、检查法的规定要求，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。3.验证风险评估对于本次验证的执行进行了如下的风险分析：严重稈度S可能性P可检测D风险优先级RPN=SXPXD1低1低1高RPNW7低可以接受，无需采取措施2中2中2中162RPN28中一定程度上接受，但应按风险优先级采取措施尽可能降低3高3高3低RPNA16或严重程度=4高不能接受，尽快采取措施降低4关键4极高4极低步骤/单元危害S可能原因/程序失败P现行控制DRPN需采取措施SPDRPN培训验证部分项目出现偏差或漂移3方案培训不

3、到位，方案的执行者不熟悉方案内容2严格执行经批准的验证报告进行培训，并考核合格318确认按照批准的方案培训，培训者均熟练掌握所培训内容。1122检验过程操作不当未达到设定标准，验证失败。3未遵循培养基适用性检查检查操作规程，未严格遵循方案规泄方法。2制定培养基适用性检杳检查操作规程，并对规稈及设立的验证方法培训，按规稈及方案要求进行操作。318确认培养基适用性检杳检杳操作规程C制泄并批准，确认人员已培训；确认操作规稈适用性。11224.验证前准备4.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准

4、后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。培训人员记录见附件1。4.2将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。4.3仪器与器具：恒温培养箱、生化培养箱、高床蒸汽灭菌器、净化工作台、无菌培养皿、第1页共10页无菌移液管。5.验证内容5.1测试环境条件要求所有检查在环境洁净度C级下的局部A级洁净度的单向流空气区域内隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物污染。5.2计数培养基5.2.1验证用菌种及培养基：5.2.1.1来源：食品药品检验

5、所5.2.1.2菌落计数用菌种菌种名称内控编号大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102]E-金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003]s-枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63501]B-白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]c-黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]A-注：编号由菌种首字母-传代代数-配制日期组成。5.2.2培

6、养基及其制备方法：取市售的脱水培养基，分别按照规定方法进行配制后灌装于洁净的三角烧瓶小，然后加寒灭菌，在实验前加温熔化备用。培养基名称培养基批号配制日期有效期至营养琼脂培养基玫瑰红钠琼脂培养基营养琼脂对照培养基玫瑰红钠琼脂对照培养基5.2.3菌液制备5.2.3.3接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜而培养基上，23〜28°C培养5〜7天的用3〜5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将抱子洗脱。然后，吸出抱子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤丝的无菌毛细吸管

7、）至无菌试管屮，取1ml加含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液至10ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10“〜10：制成每lml含他子数50〜lOOcfu的他子悬液备用。5.2.4验证方法：5.2.4.1试验组：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽泡杆菌各lml,分别注入无菌平皿屮，立刻倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混①，凝固，置30〜35°C培养48小时，计数、观察菌落情况；取白色念珠菌、黑曲霉各lml,分别注入无菌平皿屮，立刻倾注玫瑰红钠琼脂培养基

8、，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23〜28C培养72小时，计数、观察菌落情况。测定结果见附件2。5.2.4.2对照组：取人肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌各51,分别注入无菌平皿小，立刻倾注营养琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30〜35°C培养48小吋，计数、观察菌落情况；取白色念珠菌、黑曲霉各51,分别注入无菌平皿屮，立刻倾注玫瑰红钠琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23〜28C培养72小时，计数、观察菌落情况。测定结果见附件