新版GMP培养基适用性检查验证方案

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1、新版GMP培养基适用性检查验证方案培养基适用性检查验证方案文件编号：VMP-VV-501-00培养基适用性检查验证方案文件编号：VMP-VV-501-00起草人：审核人：批准人：批准日期：年月曰培养基适用性检查验证方案文件编号：VMP-VV-501-00验证立项申请表培养基适用性检查验证方案文件编号：VMP-VV-501-00验证方案审批表培养基适用性检查验证方案文件编号：VMP-VV-501-00版本号:00版本号：00版本号:00版本号:00通过验证以确认所采用的培养基适合于细菌、霉菌及酵母菌的测定及控制菌的检查，根据特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根

2、据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行微生物限度检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。2•验证目的及范围为了确认所采用细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查的培养基是否符合微生物限度检查法的规定耍求，以保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。3•验证风险评估对于本次验证的执行进行了如下的风险分析：4.验证前准备4.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。培训人员记录见附件4.2将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验

3、的结果没有影响。4.3仪器与器具：恒温培养箱、生化培养箱、高压蒸汽灭菌器、净化工作台、无菌培养皿、培养基适用性检查验证方案版本号：00文件编号：VMP-VV-501-00无菌移液管。5•验证内容5.1测试环境条件要求所有检查在环境洁净度C级下的局部A级洁净度的单向流空气区域内隔离系统内进行，其全过程严格遵导无菌操作，能防止微生物污染。5.2计数培养基521验证用菌种及培养基:注：编号由菌种首字母■传代代数■配制H期组成。522培养基及其制备方法：取市售的脱水培养基，分别按照规定方法进行配制后灌装于洁净的三角烧瓶屮，然后加塞灭菌，在实验前加温熔化备用。5.2.3菌液制备5.2

4、.3.1接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽砲杆菌的新鲜培养物至10ml营养肉汤培养基中，30〜35°C培养18—24小时,取此培养液lml,加0.9%无菌氯化钠溶液至10ml,釆用10倍递增稀释法,稀释至10-6-10-7,使菌数约为50~100cfu/ml,做活菌计数备用。5.2.3.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至10ml改良马丁培养基中，23~28°C培养24-48小时，取此培养液lml,加0.9%无菌氯化钠溶液至10ml,采用10倍递增稀释法，稀释至10-6-10-7,使菌数约为50~100cfu/ml,做活菌计数备用。培养基适用性检查验证方案版本号：00文件编号

5、：VMP-VV-501-005.23.3接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23〜28°C培养5〜7天的用3~5ml含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将抱子洗脱。然后，吸出抱子悬液(用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤丝的无菌毛细吸管)至无菌试管屮，取lml加含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液至10ml,采用10倍递增稀释法，稀释至10-4-10-6,制成每lml含泡子数50~100cfu的抱子悬液备用。5.2.4验证方法：5.2.4.1试验组:取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌各lml,分别注入

6、无菌平皿中，立刻倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30〜35°C培养48小时，计数、观察菌落情况；取白色念珠菌、黑曲霉各lml,分别注入无菌平皿中，立刻倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23〜28°C培养72小时，计数、观察菌落情况。测定结果见附件2。5.2.4.2对照组:取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌各lml,分别注入无菌平皿屮，立刻倾注营养琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30~35°C培养48小时，计数、观察菌落情况；取白色念珠菌、黑曲霉各lml,分别注入无菌平皿中，立刻倾

7、注玫瑰红钠琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置23〜28°C培养72小时，计数、观察菌落情况。测定结果见附件2。5.2.43菌回收率计算：试验组的菌回收率（％）=（试验组平均菌落数/对照组平均菌落数）X100%5.2.5判定标准：菌回收率均应不低于70%,且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。5.2.6结论：对计数培养基适用性检查的验证结果进行评价和总结。5.3控制菌培养基适用性检查：5.3.1验证用菌种:5.3.1.2验证用菌种53.1.3培养基及其制备方法：取市售的脱水培养基，分别按照规