腺相关病毒介导人前脑啡肽原基因在原代培养大鼠.doc

《腺相关病毒介导人前脑啡肽原基因在原代培养大鼠.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、腺相关病毒介导人前脑啡肽原基因在原代培养大鼠神经干细胞中的表达华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室,430030杨辉田玉科王鹏安珂高峰目的：探讨重组腺相关病毒将0的基因导入神经干细胞的能力和其功能表达。方法：1•用带有报告基因eGFP的rAAV/eGFP转染体外培养的神经干细胞，研究其对神经干细胞的感染能力及持续时间，将感染后的神经干细胞用10%血清诱导分化，观察rAAV病毒感染对细胞分化的影响及其细胞分化对外源基因表达的影响；将被感染神经干细胞培养传代观察rAAV感染对神经干细胞增殖的影响。2.运用rAAV/hPPE将人前脑啡肽原基因导入神经干细胞，采用RT-PCR,放射免

2、疫法检测hPPE在神经干细胞中的表达及功能实现。结果：1.eGFP转染神经干细胞后2即发出强烈荧光，5天出现荧光表达高峰，能持续2月以上；2.10%血清诱导神经干细胞可分化为星形胶质细胞和神经元；分化后eGFP的表达的程度和表达率均未受到影响（见图1）；3.rAAV感染神经干细胞后，神经干细胞在一个增殖周期内的增殖速率未见改变；4.转染rAAV/hPPE一周后，干细胞hPPE的表达量及其表达产物L-EK均明显高于未转染细胞（P<0.01）（表l）o结论：rAAV能将目的基因整合到神经干细胞并持续而稳定表达，并且对其生物学特性无明显影响，这种特性使rAAV成为基因治疗疼痛的重要工具。图1

3、血清诱导神经干细胞分化对GFP表达的影响（200倍）A10%FCS诱导神经干细胞分化后3天B蓝色激发光卜显示分化后细胞仍有大旱GFF表达C分化后细胞鉴定含MAF2阳性细胞（神经元）D分化后细胞鉴定含有GFAF*阳性细胞（星形胶质细胞）表1细胞培养上清液屮L-EK的含量（T±S）组别份数亮脑啡肽含量（pg/ml）原代培养697.34+15.68转染后一周6286.98+23.44*血清诱导分化后一周6304.25+21.73*