8型腺相关病毒载体介导CDNF对帕金森病大鼠模型基因治疗效果研究

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1、分类号？４２？Ｒ７．５１１８单位代码：０３研宄生学号：２０１２３４２００２密级：吉林大学硕士学位论文学术学位（）８型腺相关病毒载体介导ＣＤＮＦ对帕金森病大鼠模型基因治疗效果研究Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｎｅｔｈｅｒａｗｉｔｈｃｏｎｓｅｒｖｅｄｄｏｐａｍｉｎｅｇｐｙ＇ｎｅｕｒｏ－ｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒＤｅｌｉｖｅｒｉｅｄｂｒＡＡＶ８ｏｎｒａｔＰａｒｋｉｎｓｏｎｓｙｍｏｄｅｌｓ作者姓名：高蕾专业：帕金森病基因治疗研究方向：疫苗与基因工程药物指导教师：于

2、湘晖教授培养单位：生命科学学院２０１５年６月８型腺相关病毒载体介导ＣＤＮＦ对帕金森病大鼠模型基因治疗效果研究Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｎｅｔｈｅｒａｗｉｔｈｃｏｎｓｅｒｖｅｄｄｏａｍｉｎｅｇｐｙｐ＇ｎｅｕｒｏｔｒｏｈ－ｐｉｃｆａｃｔｏｒＤｅｌｉｖｅｒｉｅｄｂｙｒＡＡＶ８ｏｎｒａｔＰａｒｋｉｎｓｏｎｓｍｏｄｅｌｓ作者姓名：高蕾专业名称：微生物学指导教师：于湘晖教授＇学位类别：理学硕士答辩日期：＞／夕年｛月７日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面

3、版本、电子版本的任何单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作

4、者签名：＂日期：年／月５日ｍ输基帕金森病以震颤、麻痹、运动迟缓、肌肉僵直等为主要临床症状，是目前一最为常见的中枢神经系统退行性疾病之。从１８１７年发现至今，关于帕金森病一的研究直在不断地进行，然而，至今发病机制仍不明确。帕金森病最主要的病理学特征是黑质纹状体通路上的多巴胺能神经元受损，进而导致了纹状体多巴胺含量减少，由于神经递质兴奋与抑制的不平衡，而表现出个体运动方面的障碍。随着研宄的不断深入，各种治疗方案广泛地应用于帕金森病治疗研宄当中。主要包括不同的给药方式：口服药物、脑部手术、细胞移植、

5、基因治疗等；以及针对不同症状及病理特征的不同治疗靶点：多巴胺合成替代、神经营养因子保护、组蛋白去乙酰化、。、ａ突触核蛋白、小胶质神经元遗传相关基因等而目前的研宄重点，除了探宄确切的发病原因以及寻找更多更为有效的靶点之外，，，更为重要的是，在己知的范围内选择适当的治疗耙点以适合的给药手段，达到最佳的治疗效果。一，００７年被发现ＣＤＮＦ即保守性多巴胺神经营养因子于２，是种在大脑皮质、黑质、心脏、肝脏、小脑、骨骼肌等多种部位表达的分泌蛋白。研宄表明，ＣＤＮＦ能够对多巴胺能神经元产生显著的保护及修复作用，且效果优于Ｇ

6、ＤＮＦ、ＭＡＮＦ等其它类型的神经营养因子。ＣＤＮＦ的发现为神经营养因子在帕金森病治疗中的应用提供了更加美好的前景。因此，本论文选取了神经营养因子ＣＤＮＦ为主要治疗靶点，采用基因治疗的给药手段－，以８型腺相关病毒为基因治疗载体，对６ＯＨＤＡ损伤的帕金森大鼠模型进行治疗，探讨了ＣＤＮＦ对神经系统的保护以及修复作用。ＡＡＶ－ＣＤＮＦ等表达质粒论文首先构建了ｐ，并以三质粒共转的方法成功包－－－装了三种重组腺相关病毒：ＡＡＶＣＤＮＦ、ＡＡＶＲＦＰ、ＡＡＶＡＡＤＣ，并对其进行ＤＮＦ－了纯化和滴度检测。然后，通过Ｃ对６

7、ＯＨＤＡ损伤的ＰＣ１２细胞保护作用－的研究实验，在细胞水平上证明了ＣＤＮＦ对于６ＯＨＤＡ造成的神经损伤，具有Ｉｍ－明显的保护效果。在体内实验中，我们采用６ＯＨＤＡ损伤帕金森大鼠模型进行研宄，，证明了在损伤早期ＣＤＮＦ能够明显改善损伤大鼠经阿扑吗啡诱导的旋转行为，且ＴＨ阳性细胞检测结果表明，黑质内受损的多巴胺能神经元得到了ＤＮＦ也表现出了较，明显的修复，Ｃ与对照组相；而在损伤晚期好的治疗效果比一，显著降低了旋转行为，并且对黑质多巴胺能神经元有定的修复效果；为了在损伤晚期的治疗中获得更好的治疗效果，尝试

8、了ＣＤＮＦ与多巴胺合成替代联合使用的策略一，在实验中，联合治疗组表现出了比单治疗组更理想的治疗效果，大大的降低了帕金森大鼠模型的旋转数，不但ＴＨ阳性细胞检测结果与一