《pET表达系统》PPT课件.ppt

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1、pET表达系统的原理pET表达系统的原理强大、灵活的pET表达系统使用乳糖或乳糖类似物进行诱导表达，表达的时机完全由人为决定，可控性强。非诱导培养条件下，采用一定的措施可以使目的基因完全处于沉默状态而不转录。充分诱导时，几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白；诱导表达后仅几个小时，目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。可控制的表达低本底的表达高效率的表达内容介绍乳糖操纵子的正负调控T7RNA聚合酶pET表达系统123乳糖操纵子的结构operatorlacoperonIPOZYALacI阻遏蛋白β-半乳糖苷酶Lac通透酶Lac乙酰转移酶乳糖操纵子的负调控IPOZYAImRNAImRN

2、A翻译出的阻遏蛋白结合到启动子部位，阻止lac操纵子基因的转录IPOZYAImRNAlacmRNA诱导物与阻遏蛋白结合使阻遏蛋白无法与启动子结合，转录顺利进行，表达相应的酶诱导物存在时诱导物不存在时诱导物诱导物乳糖操纵子的正调控IPOZYAlacmRNA在细菌饥饿时，胞内的cAMP浓度会上升，与CAP结合促使后者活化。蛋白复合体可以结合到lac启动子区域，提高启动子的转录效率。诱导物诱导物cAMPCAPlacUV5与cAMP-CAP复合体的亲和能力大大降低在没有cAMP-CAP复合体的情况下能更好的转录laclacUV5只受lacI阻遏蛋白调控T7RNA聚合酶λ(DE3)噬菌体，单链蛋

3、白。只识别λ噬菌体启动子，不识别大肠杆菌启动子。噬菌体启动子不能被大肠杆菌RNA聚合酶识别。RNA的合成速度是大肠杆菌RNA聚合酶的5倍来源专一性转录效率pET系统表达原理lacUV5T7RNAPolymerasegeneE.Coli基因组pET目标基因T7启动子lacI阻遏蛋白未诱导的情况下pET系统表达原理lacUV5T7RNAPolymerasegeneE.Coli基因组lacI阻遏蛋白诱导的情况下pET目标基因T7启动子乳糖或IPTGpET系统的本底表达cAMP水平过高，从而刺激lacUV5启动子指导T7RNA聚合酶的转录。培养基中存在乳糖。本底表达cAMP过高培养基Nanji

4、ngNormalUniversityThankYou!