微生物实验(实验一培养基的配制和灭菌法).ppt

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1、微生物学实验本学期《农业微生物学》实验课共开设6个实验项目。培养基的配制及灭菌法；微生物测数技术；微生物菌落形态观察、纯种分离及接种技术；细菌的染色技术及基本形态、特殊构造观察；放线菌、霉菌形态观察；化学药剂对微生物的作用及拮抗微生物的筛选。实验课课程安排一个连续的大实验“环境微生物分离、纯化、观察及功能检测”实验课考核办法实验成绩（占课程总成绩30%）平时成绩技能考核：操作考试实验报告:按时交。操作：实验室规则和要求实验一培养基的配制和灭菌法培养基：按照微生物生长发育的需求，将不同组合的营养物质调制成的营养基质。一、实验原理营养成分水分碳源氮源无机盐

2、生长因子不同微生物的生长对于培养基有不同的要求（细菌、放线菌：pH值中性至偏碱性；真菌喜好酸性）天然培养基:用生物的组织、器官以及提取物配制成的培养基。通常其化学成分难以确切知道。合成培养基：用成分和数量已知的化学试剂配制而成。成分明确，重复性好。半合成培养基:部分天然材料和部分纯化学试剂配制而成。培养基的种类1.按照培养基成分不同分为：培养基的种类2.按照培养基形态的不同分为：液体培养基：将配方中的成分溶解而成，不含凝固剂。固体培养基：加入琼脂凝固剂1%-2%.半固体培养基：加入琼脂凝固剂0.2%-0.5%。培养基凝固剂琼脂：常用；海藻多糖，不易被分

3、解利用；透明度好；凝固点：45℃，溶解点：96℃；明胶;易被分解，融化温度低，不耐高温灭菌硅胶：基础培养基:选择培养基：加富培养基鉴别培养基培养基的种类3.按照培养基用途不同分为：培养基配制流程原料称量加热溶解、搅拌定容调节pH值过滤澄清分装塞棉塞和包扎、注明培养基名称、班级、组高压蒸汽灭菌冷藏、待用（配制1000mL用量）牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂10～15g水1000mLpH7.2～7.4（配制1000mL用量）可溶性淀粉20gKNO31.0gNaCl0.5gK2HPO40.5gMgSO4·7H2O0.5gFeSO4·7H2

4、O0.01g琼脂10～15g水1000mLpH7.4～7.6牛肉膏蛋白胨培养基高氏1号培养基马丁氏培养基（配制1000mL用量）葡萄糖10g蛋白胨5.0gKH2PO41.0gMgSO4·7H2O0.5g孟加拉红（1/300)10mL琼脂10～15g水1000mLpH自然马丁氏培养基培养基配方二、实验内容1以小组为单位，分别配制牛肉膏蛋白胨培养基（第一组、第四组）、高氏一号培养基（第二组）、马丁氏培养基（第三组）各400mL。234每组制备无菌水：1个90mL三角瓶无菌水、6只9mL试管无菌水。每人包1mL移液管一支。学习灭菌、消毒方法；操作高压蒸汽灭菌

5、。灭菌和消毒技术（P16)灭菌：用物理或化学的方法杀死物体上全部微生物的过程。消毒：用物理或化学的方法杀死物体上大部分微生物(特别是病原微生物)，尚存少数无害微生物。灭菌（消毒）技术过滤除菌辐射杀菌高温灭菌化学药剂灭菌常用灭菌方法干热灭菌时间：1-2小时温度：160-170℃压力：常压仪器：电烘箱高压蒸汽灭菌时间：15-30分钟温度：121℃压力:0.1MPa(1.05kg/cm2)仪器：高压蒸汽灭菌锅巴氏消毒法时间：15-30分钟温度：60-85℃压力：常压仪器：蒸锅实验作业：《微生物实验报告册》P2：1-3