实验二微生物培养基的配制和灭菌

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1、实验二微生物培养基的配制和灭菌一、实验目的了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。（一）培养基的配制二.实验原理1.培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。不同微生物对营养物质的要求各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。培养基按成分可分为天然培养基、合成培

2、养基和半合成培养基；按物理状态可分为固体培养基、半固体培养基（0.2%～0.5%的琼脂）和液体培养基；按用途可分为基础培养基、营养培养基、鉴别培养基和选择培养基等。培养基是指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。培养基简介碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水营养物质的浓度要适宜营养物质之间的配比要适宜培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件要适宜。细菌：pH7.0~8.0放线菌：pH7.5~8.5酵母菌：pH3.8~6.0霉菌：pH4.0~5.8藻类：pH6.0~7

3、.0原生动物：pH6.0~8.0初始pH通常培养条件：培养基的种类按照培养基的物理状态可分为1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基。3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。琼脂是最优良的凝固剂，自1880年开始用于配制微生物培养基以来，至今经久不衰。实验室的常用培养基：细菌：牛肉膏蛋白胨培养基；放线菌：高氏1号合成培养基培养；酵母菌：麦芽汁培养基；霉菌：查氏合成培养基；称量--配置--调节pH值-

4、-过滤--分装--灭菌1.称量按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。培养基配制的基本步骤2.配调向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。如果配方中含有淀粉，先将淀粉用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。3.调节pH值培养基溶解均匀并冷却至室温时用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1mo

5、lHcl和1molNaOH），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时，不用调节。4.过滤用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。5.分装将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量可分为下面几方面：（1）斜面：装量为管长的1/4-1/5。（2）液体培养基、高层培养基、半固体培养基：装载量不超过管长的1/3。（3）三角瓶：装量不超过容积1/2。6.灭菌塞棉塞，包扎，灭菌。高压蒸汽灭菌法：是在密闭的加压容器

6、内进行，加热使器内的水产生蒸汽，由于密闭，增加了器内的压力，使水的沸点升高，从而获得高于100度的蒸汽温度。牛肉膏蛋白胨固体培养基配方：牛肉膏0.3g蛋白胨1g氯化钠0.5g琼脂2g水100mLpH7.2~7.4灭菌121℃，20min牛肉膏蛋白胨半固体培养基配方：琼脂0.3g牛肉膏蛋白胨液体培养基配方：琼脂0g牛肉膏蛋白胨培养基的配制1、固体培养基（平板制作）2、固体培养基（斜面制作）2、半固体培养基3、液体培养基三.操作步骤及本次实验具体安排（一）平板固体培养基制作1.按配方称取各组分(按100ml计算)

7、到的三角瓶中.2.加入100mL水.3.在酒精灯上完全融化，取部分制作斜面培养基3.其余部分塞上硅胶塞,用牛皮纸包扎好;4.高压蒸汽灭菌5.灭菌后,当培养基冷却至50℃左右时,倾注平皿(每100ml可制备5-6个平皿)6.凝固后放冰箱备用（二）斜面培养基制作1.在空试管内倒入2～3mL上述已经溶解好的培养基，【注意尽量不要让培养基沾到试管口】塞好硅胶塞.2.放入烧杯中,高压蒸汽灭菌.3.摆斜面,凝固后放冰箱备用.用于活化菌种，或培养菌种的斜面用于保存菌种的斜面搁置斜面当培养基冷却至50℃左右时，将试管带棉塞的

8、一端搁在一根木棒上。搁置的长度要合适，使培养基形成的斜面的长度不超过试管总长的一半。（三）液体培养基制作1.按牛肉膏蛋白胨液体培养基配方称取相应成分到250ml的三角瓶中.2.加入100mL水.3.充分溶解.（取出50ml用于半固体培养基制作）4.在空试管内倒入2～3mL已经溶解好的培养基，【注意尽量不要让培养基沾到试管口】塞好硅胶塞.5.放入烧杯中,高压蒸汽灭菌.6.冷却后放冰箱备用.牛肉膏蛋白胨