实验一微生物培养基的配制和灭菌

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1、微生物学实验课堂纪律严格遵守实验室规章制度严肃课堂纪律不允许无故旷课、早退迟到工作服进入微生物实验室的注意事项1.进入实验室必须穿白大褂2.实验室内不准吃东西3.在实验室内不要趴在桌子上4.实验完成后值日生留下做好清洁工作（值日工作实行组长负责制，纳入实验成绩）5.离开实验室前洗手6.实验现象要隔天观察的实验，必须要按时到实验室记录实验现象实验安排实验一微生物培养基的配制和灭菌实验二微生物的纯培养技术实验三显微镜油镜的使用及细胞形态的观察实验四土壤、水的细菌学检查实验五放线菌、霉菌及酵母菌的形态观察实验六环境因素对微生物的影响实验七微生物生理生化反应观察实验八微生物遗传实验实验报告要求一个实

2、验，一份实验报告，有连续性的实验等到做完后再写实验报告。实验报告内容：1.实验项目名称2.实验目的3.实验原理4.实验步骤5.实验结果与分析（即使实验失败也要写好分析）6.思考题实验一微生物培养基的配制和灭菌一、实验目的了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。（一）培养基的配制二.实验原理1.培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。不同微生物对营养物质的要求各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的

3、pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。培养基按成分可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基；按物理状态可分为固体培养基、半固体培养基（0.2%～0.5%的琼脂）和液体培养基；按用途可分为基础培养基、营养培养基、鉴别培养基和选择培养基等。培养基是指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。培养基简介碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水营养物质的浓度要适宜营养物质之间的配比要适宜培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件要适宜。细菌：pH7.0~8.0放线菌：pH7.5~8.5酵母菌：pH3.8~6.0霉菌：pH4.0~5.8藻类：pH

4、6.0~7.0原生动物：pH6.0~8.0初始pH通常培养条件：培养基的种类按照培养基的物理状态可分为1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基。3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。琼脂是最优良的凝固剂，自1880年开始用于配制微生物培养基以来，至今经久不衰。实验室的常用培养基：细菌：牛肉膏蛋白胨培养基；放线菌：高氏1号合成培养基培养；酵母菌：麦芽汁培养基；霉菌：查氏合成培养基；称量--配置--调节pH值--过滤--分装--灭菌1.称量按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。

5、对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。培养基配制的基本步骤2.配调向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。如果配方中含有淀粉，先将淀粉用少量冷水调成糊状并在火上加热搅拌，然后加足水分及其他药品，待完全熔化后补足所失水分。3.调节pH值培养基溶解均匀并冷却至室温时用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1molHcl和1molNaOH），要缓慢少量且多加搅拌。培养基配方为自然pH时，不用调节。4.过滤用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。5.分装将制好的

6、培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。固体培养基要趁热装。分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。分装量可分为下面几方面：（1）斜面：装量为管长的1/4-1/5。（2）液体培养基、高层培养基、半固体培养基：装载量不超过管长的1/3。（3）三角瓶：装量不超过容积1/2。6.灭菌塞棉塞，包扎，灭菌。高压蒸汽灭菌法：是在密闭的加压容器内进行，加热使器内的水产生蒸汽，由于密闭，增加了器内的压力，使水的沸点升高，从而获得高于100度的蒸汽温度。牛肉膏蛋白胨固体培养基配方：牛肉膏0.3g蛋白胨1g氯化钠0.5g琼脂1.5g水100mLpH7.2~7.4灭菌121℃，20min牛

7、肉膏蛋白胨半固体培养基配方：琼脂0.3g牛肉膏蛋白胨液体培养基配方：琼脂0g牛肉膏蛋白胨培养基的配制1、固体培养基（平板制作）2、固体培养基（斜面制作）2、半固体培养基3、液体培养基三.操作步骤及本次实验具体安排（一）平板固体培养基制作（由第1,2,3,4组同学各做2X100ml）1.称取一定量的营养琼脂到250ml的三角瓶中.2.加入100mL水.3.塞上硅胶塞,用牛皮纸包扎好;4.高压蒸汽灭菌5.灭菌后,