溶剂萃取法提取蓝莓中花色苷.pdf

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1、第40卷分析化学(FENXIHUAXUE)来稿摘登第12期2012年12月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1952～1953D0I：10．3724／SP．J．1096．2012．20901溶剂萃取法提取蓝莓中花色苷王继萍柏广新李劲然。王叶宝冷吉燕秦俊杰(吉林大学白求恩第一医院，长春130021)(中国吉林森林工业集团有限责任公司，长春130000)(吉林大学白求恩医学院，长春130021)1引言蓝莓(Bluebetry)，又称越橘、蓝浆果，属杜鹃花科(Ericaceae)越橘属(Vacciniumspp)多年生落叶或常绿灌木。蓝莓果实呈深蓝色，含有丰富的花

2、色苷。花色苷是花色素与糖以糖苷键结合而成的黄酮多酚类化合物，结构性质稳定，花色素的基本结构为3，5，7--羟基一2_苯基苯并吡喃，由于苯环中取代基、羟基和甲氧基位置和数量不同，衍生出不同的配糖体化合物。在花色素A环上的羟基以糖苷键与糖结合，形成花色苷。蓝莓花色苷具有抗氧化、清除自由基、降血脂、抗炎、改善胰岛素抵抗、保护内皮细胞及抗肿瘤等多种生物学功能[1~。陆英等采用高速逆流色谱分离制备紫甘薯花色苷。对蓝莓花色苷的研究主要集中在生理功能和稳定性方面，而对蓝莓花色苷的提取研究较少。为探索更佳的提取工艺，提高花色苷的提取率，本实验采用酸性乙醇对蓝莓花色苷进行提取，并用AB-8大孑L树脂纯化，为以后

3、的工业化生产提供理论依据。2实验部分2．1仪器与试剂50CONC型紫外扫描仪(美国瓦利安公司)；B4-095型分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)；循环水式真空泵(巩义市英峪仪器厂)；DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(上海豫康科教仪器设备有限公司)；OSB一2100型EYELA油浴锅(上海爱朗仪器有限公司)；N_1100型EYELA旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)；DZF一6200型真空干燥箱(t-海精密实验设备有限公司)；PHS一25酸度计(上海里达仪器厂)。蓝莓(吉林吉康蓝莓生产示范基地，7月中旬采收)；AB-8大孔树脂(天津南开大学化工厂)；)；柠檬酸、柠檬酸钠、FeC1、醋酸铅

4、等均为国产分析纯试剂。2．2实验方法(1)粗提取适量蓝莓果，破碎，在4O℃，用pH3的60％乙醇溶液浸提2h，抽滤，收集滤液；于相同条件下，将再蓝莓果残渣提取1次，将2次的滤液于40℃下减压浓缩，得到红色粘稠的粗提液。(2)纯化将花色苷粗提液用pH=3的柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液稀释成3g／mL，加入AB一8树脂柱，充分吸附，以超纯水冲洗去杂质，控制流速约为1mL／min，用60％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。(3)真空干燥将洗脱液至于真空干燥箱中干燥，得紫黑色提取物。(4)花色苷提取物组成分析分别用pH1．0的酸性水溶液和0．1％(V／V)HC1-甲醇溶液溶解蓝莓花色苷样品，用紫外可见分光光度计进行

5、光谱扫描。得到蓝莓花色苷的紫外可见光谱图。将蓝莓花色苷甲醇溶液分别加入A1C1，和CH，ONa,进行光谱扫描，并与蓝莓花色苷甲醇溶液中吸收光谱比较。(4)红外光谱法分析提取物的化学基团组成取少量样品置于玛瑙研钵中，再加适量KBr粉末研磨，放人压片模具中加压，3min后取出样品，放入仪器的样品槽中，进行傅立叶变换红外光谱扫描，得到化合物的红外光谱图。(5)花色苷提取物色价及含量精确称取自制的花色苷提取物O．05g，用pH3．0的柠檬酸缓冲液定容至100mL，在520nm处测定其吸光值，计算花色苷提取物色价及含量。3结果与讨论3．1花色苷提取物组成分析(1)FeC1，显色反应提取物经乙醇溶解后，滴

6、加1％FeCI，数滴，振荡后溶液呈深褐色，表明其具有酚羟基的特征反应。(2)中性醋酸铅反应向1g／L蓝莓提取物中加入中性醋酸铅，立即产生蓝白色沉淀。随着Pb浓度的增加，沉淀逐渐增多，表明提取物中含有酚基。因为酚基是黄酮类化合物的官能团之一，因此可以判断蓝莓花色苷属于黄酮花色苷类色素。(3)紫外一可见光谱分析测得提取物在60％乙醇与pH=3的柠檬酸一柠檬酸钠溶液中于536和524nm存在吸收峰，该吸收峰为花色苷的特征峰。蓝莓花色苷在酸性水溶液中的吸收峰分别在279和520am处，在甲醇溶液中的吸收峰分别在284和537am处(图1)。花色苷最大吸收波长一个在可见光区的5o0～540am附近，另一

7、个在紫外275nm附近，由此可以判断蓝莓色素属于花色苷类色素。在300-330nm处有小的吸收峰，说明蓝莓花色苷中有酰化的花色苷。向蓝莓花色苷的甲醇溶液中加A1CI后，可见区的最大吸收峰向长波移动，说明含有B2环有邻位酚羟基的花色苷。3．2红外光谱法分析蓝莓花色苷中的化学基团组成对蓝莓提取物进行红外检测(图2)，在3424．1，2932．673，1381．954，1637．514，1197．758