酶提取桑葚渣中花色苷的提取.doc

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1、桑葚渣中花色苷的提取摘要：以提高花色苷的提取率为目的。探索果胶酶提取桑葚渣中花色苷的工艺条件。考察影响提取效果的主要因素：酶用量，酶解时间，酶解温度，根据单因素实验结果，设计正交实验优化桑葚花色苷提取工艺。1.材料与方法1.1材料酿桑葚酒后的桑葚渣1.2主要仪器紫外可见光光度计TU-1800PC电热恒温振荡水槽DKZ-2电子分析天平BS-210S高速组织搅碎机DS-1电子PH计PP-15超滤装置纳滤装置1.3主要试剂果胶酶30000U/g柠檬酸分析纯磷酸氢二钠分析纯盐酸分析纯无水乙醇分析纯1.4试验设

2、计1.4.1提取液的配制磷酸缓冲液的配制；配制0.1mol/L的柠檬酸溶液；配制0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液；0.1mol/L的柠檬酸溶液398ml，加入0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液102ml。稀释1000ml。2.桑葚中花色苷提取2.1用果胶酶酶解桑葚渣称取10g的桑葚渣于具塞的锥形瓶中，加入一定量的去氧水，加入酶进行酶解。2.2粗提取花色苷（1）将上述各酶解后的溶液进行灭酶处理，（2）过滤提取上清液。（3）在提取液中加入聚合硫酸铁，并进行过滤，除去絮凝沉淀物，得初级滤液（4）用石油醚对初级

3、滤液萃取3次除去脂类（1）最后再真空抽滤，保证提取液无颗粒杂质。最终得到桑葚花苷素粗提取液。2.3纯化花色苷（1）用大孔树脂对粗提取液进行吸附，然后采用45%的乙醇水溶液对已经吸附在大孔树脂上的花色苷有效成分进行洗脱，得洗脱液；（2）采用纳滤装置对（1）所得洗脱液进行过滤处理，得到透过液和截留液，实现对所需溶液和洗脱溶剂的分离；（3）将所需溶液旋转蒸发后装入培养皿中,冷藏于-80℃冰箱冷冻2ｈ后放入冷冻干燥机冻成干粉。（4）所得干粉即为纯化后的花色苷2.4称量干粉的重量3.花色苷理论测定指标花色苷含量

4、：采用消光系数法计算花色苷含量，用分光光度计，于1cm比色皿中，波长为530nm处测定吸光度。消光系数法：用9mL酸化乙醇（95%乙醇和1.5N盐酸，体积比85：15）于1cm比色皿中，在波长为530处测定吸光值。总花色苷含量计算公式如下：总花色苷含量式中：E-530nm处直接测定的吸光度值（)V-萃取液测定时稀释的总体积数（mL)M-样品重量（g)98.2-1%de1花色苷1mol消光系数4.桑葚渣中花色苷酶提取法单因素实验4.1.1果胶酶用量对花色苷提取量的影响称取10g桑葚渣于具塞的锥形瓶中，加

5、入9ml磷酸缓冲溶液，在温度50℃，PH3.0，酶解时间1h条件下，酶用量分别为0，3，6，9，12和15mg/g果渣酶解后，移取上清液1ml，测定花色苷含量。果胶酶（mg/g）03691215花色苷提取率画出折线图：由图可知：4.1.2果胶酶酶解PH对花色苷提取率的影响称取10g桑葚渣于具塞的锥形瓶中，加入9ml磷酸缓冲溶液，酶用量40mg/g果渣，酶解时间1.5h，温度50℃。分别在PH为2，3，4，5，6，7的条件下进行酶解，移取上清液1ml，测定花色苷含量。PH234567花色苷提取率画出折线

6、图：由图可知：4.1.3果胶酶酶解温度对花色苷提取率的影响称取10g桑葚渣于具塞的锥形瓶中，加入9ml磷酸缓冲溶液，酶用量40mg/g果渣，酶解时间1.5h，PH3.0，分别在温度为20℃，30℃，40℃，50℃，60℃和70℃的条件下进行酶解后，移取上清液1ml，测定花色苷含量。酶解温度/℃203040506070花色苷提取率画出折线图：由图可知：4.1.4果胶酶酶解时间对花色苷提取率的影响称取10g桑葚渣于具塞的锥形瓶中，加入9ml磷酸缓冲溶液，酶用量40mg/g果渣，在温度50℃，PH3.0，酶

7、解0，0.5，1，1.5，2和2.5h后，移取上清液1ml，测定花色苷含量。酶解时间/h00.511.52.02.5花色苷提取率画出折线图：由图可知：4.2花色苷酶法提取的条件优化根据单因素实验结果。以酶用量，酶解时间，酶解温度为考察因素，按正交法对酶法提取工艺进行研究，优化花色苷酶法提取的最佳工艺条件。4.2.1正交实验提取花色苷选用4因素3水平正交设计法,见下表水平因素果胶酶用量PH提取温度/℃提取时间/h133401264501.5395602正交表实验号果胶酶用量PH提取温度提取时间收率111

8、112122231333421225223362311731338322293311Σ1Σ2Σ3K1K2K3R由图可知：5.结论