分子印迹固相萃取联用高效液相色谱分离测定海水中的膝沟藻毒素GTX1,4.pdf

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1、第44卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第2期2016年2月ChineseJournalofAnalyticalChemistry212～217DOI：10．11895／j．issn．0253-3820．150744分子印迹固相萃取联用高效液相色谱分离测定海水中的膝沟藻毒素GTX1，4梅晓颀何秀平王江涛(中国海洋大学海洋化学理论与工程技术教育部重点实验室，青岛266100)摘要采用分子印迹技术，以鸟嘌呤核苷为虚拟模板，本体聚合，合成GTX1，4的分子印迹聚合物(MIP)。傅里叶红外变换光谱(FT—IR)

2、和扫描电子显微镜(SEM)的结果显示，MIP具有分布均匀、大小均一的孔穴。平衡吸附实验表明，分子印迹聚合物(MIP)比非分子印迹聚合物(NIP)具有更高的结合容量，对膝沟藻毒素GTXl，4有更好的选择性。用MIP填充固相萃取小柱(MISPE)，以0．1mol／L乙酸溶液为淋洗液，甲醇一水(95：5，)溶液为洗脱液时回收率最高，达到85．0％。用优化后的淋洗洗脱条件测定微小亚历山大藻和塔玛亚历山大藻藻液中的GTX1，4，分别为1．10和0．99g／L，RSD分别为3．3％和4．4％，说明本方法具有较好的检测限和较高

3、的测定精密度。关键词膝沟藻毒素GTX1，4；分子印迹固相萃取；分离富集；微小亚历山大藻；塔玛亚历山大藻1引言麻痹性贝毒(Paralyticshellfishpoisoning，PSP)是一类以石房蛤毒素(Saxitoxin，STX)为骨架，具有四氢嘌呤结构的生物碱分子。根据取代基的不同，可将其分为四类化合物l1]：氨基甲酸酯类毒素(Carbamatetoxins)、N一磺酰胺甲酰基类毒素(N．Sulfocarbamoyltoxins)、脱氨甲酰基类毒素(Decarbamoyltoxins)以及脱氧脱氨甲酰基类毒素

4、(Deoxydecarbamoyltoxins)。膝沟藻毒素1，4(GTX1，4)就是一类氨基甲酸酯类毒素，是赤潮发生时海水中存在的主要藻毒素之一，其产毒藻种主要有亚历山大藻属(Alexandrium)的A．taraarense、A．minutum，膝沟藻属(Gonyaulax)的G．tamarensis，裸甲藻属(@mnodi—nium)的G．catenatum，以及旋沟藻属(Prodinium)的P．bahamensevar．compressum等属种J。同时，由于PSP在贝类中大量富集，人类误食后易中毒，其

5、毒性机理是：PSP的活性部位与神经细胞膜上Na通道位点1的氨基酸残基高度结合，阻断了Na通道，从而产生麻痹作用']，使人头疼、头晕，呼吸困难，甚至死亡，因此研究一种快速高效测定PSP的方法非常重要。目前，检测PSP的方法主要有生物检测法和色谱法等，其中色谱法是现在最普遍的方法。生物检测法包括小鼠生物测试法(Mousebioassay，MBA)，m和酶联免疫法(Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)⋯，；色谱分析法主要是高效液相色谱．质谱联用法(HPLC—Ms)，包括柱前衍生和柱

6、后衍生¨。虽然HPLC—MS具有高选择性和灵敏度、检测限低等优点，但存在费时、成本高且技术要求高等缺点，限制了其广泛应用。分子印迹固相萃取技术(MISPE)作为一种常见的分离富集技术，能够选择性地吸附目标物质，再通过合适的淋洗、洗脱步骤，使目标物质分离富集。该技术具有高选择性、高特异性结合能力、高灵敏度和高回收率等优势，且成本低，耗时少，技术要求不高，已逐渐成为分离富集及检测微量、痕量物质的普遍方法。本研究采用本体聚合法，以GTXI，4结构类似物鸟嘌呤核苷为模板，甲基丙烯酸(MAA)为功能单体，乙二醇二甲基丙烯酸

7、酯(EGDMA)为交联剂，偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂，合成了分子印迹聚合物，对该聚合物的性质进行了相关分析，并测定了塔玛亚历山大藻和微小亚历山大藻藻液中GTX1，4的浓度。2015-09—19收稿；2015．12-04接受E—mail：jtwang@OUC．edu．cn第2期梅晓颀等：分子印迹固相萃取联用高效液相色谱分离测定海水中的膝沟藻毒素GTX1，42132实验方法2．1仪器、试剂与材料日立HitachiD-2000Elite高效液相色谱，L-2485荧光检测器；NicoletAvatar-360傅里叶

8、变换红外光谱(171"一IR)；13立HitachiS-4800冷场发射扫描电镜(SEM)；MilliporeMilli—Q超纯水仪。GTX1，4标准品(GTX1浓度为(60．4+3．1)~mol／L，GTX4浓度为(i9．7+1．6)~mol／L，加拿大国家海洋研究所)；鸟嘌呤核苷(99％，上海阿拉丁生化科技)；MAA(99％，天津博迪化工)；EGDMA(98％，上海阿