芯片电泳在免核酸提取PCR产物分析中的应用.pdf

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1、中华医院感染学杂志2014年第24卷第9期ChinJNosocomiolVo1．24No．92014doi：10．11816／cn．ni．2014—130580·论著·芯片电泳在免核酸提取PCR产物分析中的应用雷秀霞，李卓然，梁广铁，龙幼敏，陈英姿，张小精，王秋平(1．广州市第一人民医院检验科，广东广州510180；2．南方医科大学医学影像系，广东广州510515)摘要：目的探讨两种免核酸提取试剂联合应用DNA芯片电泳是否能快速、准确地用于新德里金属酰胺酶(NDM-1)阳性细菌的鉴定，了解该联合检测方法在流行

2、病病原体快速鉴定中的应用价值，为流行性病原体的快速鉴定提供便捷手段。方法取1个(或0．1个)麦氏单位NDM-1(+)菌液加入免核酸提取试剂后直接进行PCR扩增，扩增产物用自制的芯片电泳进行产物分析，通过样品迁移时间与标准品比较精确计算出目的基因片段长度并大致推算产物的含量。结果两种免核酸提取试剂联合芯片电泳分析技术能快速、准确、高效地扩增出新德里金属酰胺酶NDM一1(+)细菌的目的基因片段，尤其湖南某厂家的试剂灵敏度更高。结论该联合检测方法在流行病尤其是突发性病原体的快速鉴定、监测中具有潜在的临床应用价值。关

3、键词：芯片电泳；新德里金属酰胺酶阳性细菌；免核酸提取试剂中图分类号：R446文献标识码：A文章编号：1005-4529(2014)09—2326-04ApplicationofchipelectrOph0resisinextractionofPCRproductswithfreenucleicacidextractionreagentsLEIXiu—xia，LIZhuo—ran，LIANGGuang—tie，L0NGYOU—min，CHENYing—zi，ZHANGXiao—jing，WANGQiu—ping

4、(*GuangzhouFirstPeopleSHospital，Guangzhou，G~angdong510180，China)Abstract：OBJECTIVEToexplorethetWOkindsoffreenucleicacidextractionreagentscombinedwithDNAchipe1ectrophoresisinrapidandaccurateidentificationofNewDelhimetallo—lactamase(NDM一1)一positivestrainsandu

5、nderstandthevalueofthiscombinationmethodinrapididentificationofprevalentpathogensSOastooffercon—venientmeansforrapididentificationofprevalentpathogens．METHODSOne(or0．1)McNamaraunitsNDM-1(+)bacteriumwasaddedtOfreenucleicacidextractionreagentsfordirectPCRampl

6、ification，thentheamplifiedproductswereanalyzedbymeansofthechipe1ectrophoresis，andthelengthsofgenefragmentswereaccuratelycalculatedthroughthemigrationtimeofthesamplesandcomparisonwiththestandardSOastoroughlycalculatethecontentsoftheproducts．RESULTSThetWOkind

7、soffreenucleicacidextractionreagentscombinedwithchipe1ectrophoresiscouldamplifythetargetedgenefragmentsintheNDM一1(+)-producingbacteria，andthereagentproducedbyacompanyinHuman，inparticularly，hadhighersensitivity．CONCLUSIONThecombinationdetec—tionmethodhaspote

8、ntialclinicalvalueinrapididentificationandsurveillanceofepidemic，especiallythesuddenpathogens．Keywords：Chipelectrophoresis；NewDelhimetallolactamase-positivebacteria；Freenucleicacidextractionreagent对传统P