细菌透明质酸酶基因工程菌的构建及高效表达.pdf

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1、食品与药品FoodandDrug2014年第16卷第5期3O5·论著·细菌透明质酸酶基因工程菌的构建及高效表达钊倩倩，张秀华，刘飞，李珍爱，朱希强’¨，凌沛学(1．山东省生物药物研究院山东省生物药物重点实验室，山东济南250101；2．山东省药学科学院山东省多糖类药物工程实验室，山东济南250101；3．山东福瑞达医药集团公司，山东济南250101)摘要：目的将兽疫链球菌透明质酸酶^yf基因在大肠杆菌原核表达系统中高效分泌表达。方法通过PCR方法扩增得兽疫链球菌)，，基因，XhoI和^7_c0I双酶切后，连入表达载体pE

2、T26b(+)，并转化入大肠杆菌，经低温异丙基—D一硫代半乳糖苷(IPTG)或乳糖诱导表达，DNS法检测胞外透明质酸酶活性。结果成功构建含兽疫链球菌透明质酸酶基因．iz，的大肠杆菌基因工程菌株，经IPTG诱导并添加甘氨酸后胞外透明质酸酶活性高达5．3×10U／mL。结论实现了透明质酸酶在原核系统中的表达，为工业化生产奠定了基础，具有很好的市场前景。关键词：兽疫链球菌；透明质酸酶；大肠杆菌；基因工程；分泌表达中图分类号：Q78文献标识码：A文章编号：1672．979X(2014)05-0305—04Construction

3、andHighExpressionOfHyalurOnidaseGenefromStreptococcuszooepidemicusinEscherichiacoliZHAOQian．qian，，ZHANGXiu．hua'，LIUFei’。，LIZhen．ai。’，ZHUXi．qiang，，，LINGPei．xue(1．InstituteofBiopharmaceuticalsofShandongProvince，KeyLaboratoryofBiopharmaceuticals，Jinan250101，China；2．

4、ShandongProvincialEngineeringLaboratoryofPolysaccharideDrugs，ShandongAcademyofPharmaceuticalSciences，Jinan250101，ina；3．ShandongFredaPharmaceuticalGroupCo．，Ltd．，Jinan250101，China)Abstract：ObjeetiveToobtainhighlevelsecretoryexpressionofhya1uronidasehylgenefromStrep

5、tococcuszooepidemicusinEscherichiacoli．MethodsTheStreptococcuszooepidemicushyaluronidasehylgenewasamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)，connectedtopET26b(+)vectorafterdigestedbyXhoIandNcoI，andtransformedintoEscherichiacoliBL21strain．TherecombinantplasmidpET26-h

6、ylwasexpressedinEscherichiacoliBL21，whichwasinducedbyisopropyl一D一1一thiogalactopyranoside(IPTG)orlactoseatalowtemperature．Theextracellularhya1uronidaseactivitywasdetectedby3，5一dinitrosalicylicacid(DNS)method．ResultsTheStreptococcuszooepidemicushyaluronidasehy，gene

7、wassuccessfullyexpressedinEscherichiacoliatahighleve1．ThecrudeenzymeactivitydetectedbyDNSmethodwasupto5．3×10U／mLafterinductionbyIPTGandglycine．ConclusionAnextracellularprokaryoticexpressionsystemcanbeconstructedinEscherichiacolitoexpresshyaluronidase，whichlaysthe

8、foundationforindustrialproductionandhasgoodmarketprospects．KeyWords：Streptococcuszooepidemicus；hyaluronidase；Escherichiacoli；genomicengineering；secretoryexpres