培养基的配制方法.doc

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1、实验一培养基的配制生科三班李林406081432008.9.16周二上午一•实验H的：1.明确配制微生物培养基的原理；2.掌握配制微生物通用培养基的一•般方法和操作步骤；3.掌握是湿热灭菌法的原理和操作。二•实验原理：膏蛋白月东培养基是一种天然培养基。牛肉膏是牛肉浸液的浓缩物，含有丰富的营养物质，不仅能为微生物提供碳源、氮源，还含有多种维生素。蛋白月东是酪蛋白、大豆蛋白或鱼粉等经过蛋白酶水解后，屮间产物，含有豚和氨基酸等丰富的含氮素营养物，再加入的NaCl为细菌所需的无机盐，加入的H来水可提供微量元素。

2、配置好的培养基用湿热灭菌法进行灭菌。三•材料和仪器:亠1.试剂:牛肉膏，蛋白腺,氯化钠，lmol/LNaOH,lmol/LHCl2.器皿：台秤，玻璃烧杯，搪瓷烧杯，三角瓶，量筒，沙漏，试管，玻棒等3.其他：PH试纸，牛角匙，牛皮纸，棉花，沙绳，灭菌锅等。四•实验步骤：1.配方及配量：牛肉膏0.9g蛋白豚3g,氯化钠1.5g,琼脂条4.5g,水30()mL,PH7.2〜7.4。2.称取药品：按培养基配方及配量分别称取各药品，取少量水于烧杯屮，将各培养基成分(除琼脂)逐一•加入水屮待溶。3.加热溶解：将搪瓷

3、杯放到电热炉上，用文火加热，病不断搅拌，促使各药品快速溶解，然后补充水分至所需培养基的量。4.调节PH:初配好的牛肉膏蛋白月东，培养液是微酸性的，故需用lmol/LNaOH调PH7.2-7.4o5.加琼脂：向调好的培养基小加入琼脂条。6.加棉塞：用8层纱布纸杯成通气塞，灭菌前将方形纱布盖在瓶口，将其屮间部位用手指塞入瓶口内，再将四角折叠成塞子状后加纸套包扎好，然后灭菌。7.包扎：在棉塞外再包上一•层牛皮纸，以防灭菌时冷凝水直接沾湿棉塞及存放屮防止尘埃等污染。8.灭菌：将待灭菌的培养基放入加压灭菌锅内，于

4、121C灭菌20min.五•实验结果：按照实验方法配制的培养基透明但有些发黄，说明说有物质均完全溶解，基本符合实验要求，颜色有些发黃可能是因为加入牛肉膏，也可能是因为加入牛肉膏的n寸候所用火温较高，使牛肉膏粘底了，稍有烧糊或烧焦了，致使培养基较黄。一周以后观察，配制的无菌牛肉膏蛋白月东同体培养基屮，无菌落生成，说明配制的培养基符合要求六•思考题：配制牛肉膏蛋白月东斜面培养基有哪些操作步骤，哪几步易出差错?如何防止答：配方及配量，称取药品，加热溶解，调PH,加琼脂，加棉塞，包扎，灭菌。易出差错的步骤：(1

5、)称药品的牛角匙不要混用，称完药品应及吋盖紧瓶盖，瓶盖切莫张冠李戴,尤其是易吸潮的蛋口腺等更应注意及时盖紧瓶盖与旋紧瓶盖。（2）调PH吋要小心操作，尽量避免回调而带入过多的无机离子。（3）包扎吋，在棉塞外再包上一层牛皮纸，以防灭菌时冷凝冰直接粘湿棉塞。