ms培养基配制方法 new

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1、MS培养基一、大量元素母液1：大量A500ml母液称取：50×NH4NO3KNO3MgSO4•7H2OKH2PO441.25g47.5g9.25g4.25g母液2：大量B500ml母液称取：100×CaCl2•2H2O或CaCl222g16.6g母液3：Fe盐1000ml母液称取：100×FeSO4•7H2ONa2-EDTA或EDTA-Fe(10mM-100μM)2.78g3.73g4.211g注：配制顺序如下1.称取3.73gNa2-EDTA•2H2O溶解于200ml去离子水中，并置于70℃预热(A)；2.称取2.78gFeSO4•7H2O溶解于20

2、0ml去离子水中(B)；3.将B缓慢倒入A中混合，边倒边搅动，置于70℃水浴锅中螯合2h；4.冷却后定容至1L。二、微量元素母液4：微量1000ml母液称取：1000×MnSO4•4H2OZnSO4•7H2OH3BO3KI22.3g8.60g6.20g0.83gNa2MoO4•2H2OCuSO4•5H2OCoCl2•6H2O0.25g0.025g0.025g三、有机物质母液5：有机（不含肌醇）1000ml母液称取：100×盐酸硫胺素VB1盐酸吡哆醇VB6烟酸VB3VPP甘氨酸（氨基乙酸）0.01g0.05g0.05g0.2g1L工作液的配制:母液1：大

3、量A母液2：大量B母液3：Fe盐母液4：微量母液5：有机肌醇蔗糖20ml10ml10ml1ml10ml0.1g30g定容至1L，用1MNaOH调pH至5.8，于121℃，高压灭菌20min。注：配固体培养基可在调pH后加适量Agar或Phytagel；肌醇也可加入有机母液。四、抗生素和激素母液试剂名称配制方法母液浓度Amp（氨苄青霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50mg/mlKm（卡那霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50mg/mlStr（链霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌50mg/mlCb（羧苄青霉素）双蒸水溶解，定容，过滤灭菌250mg/ml6-BA

4、(6-苄基嘌呤)1MNaOH或盐酸溶解，双蒸水定容，高压灭菌1mg/mlNAA（萘乙酸）1MNaOH溶解，双蒸水定容，高压灭菌1mg/mlIAA95%乙醇溶解，双蒸水定容，过滤灭菌1mg/ml五、乙酰丁香酮(Acetone-syringone,AS)称取196.2mgAS用10mlDMSO溶解，母液浓度100mM，-20℃避光保存，工作浓度100~200μM六、MS溶液的混合配制MS培养基时，每1L培养基取：母液1：大量A母液2：大量B母液3：Fe盐母液4：微量母液5：有机肌醇蔗糖6-BANAAMS0无菌苗(1/2MSAmp)10ml5ml5ml0.5

5、ml5ml0.0515g——MS1共培养(AS6-BA,NAA)20ml10ml10ml1ml10ml0.1g30g500μL100μLMS2分化(KmCb6-BA,NAA)20ml10ml10ml1ml10ml0.1g30g500μL100μLMS3生根(KmCbIAA)10ml5ml5ml0.5ml5ml0.05g15g——5种母液分别依次加入到800ml蒸馏水中，混匀后加入肌醇、蔗糖和能高压灭菌的激素（6-BA和NAA），定溶至1000ml，用1MNaOH调pH至5.8。最后加Phytagel（Sigma）4.4g或Agar10g。灭菌完后，在培

6、养基凝固前加入AS或抗生素及不能高压灭菌的激素（IAA）。